1-烯烴作為一種理想的下一代能源物質(zhì)以及重要的化工原料,其合成方式受到廣泛的關(guān)注。目前,這些烯烴主要通過(guò)從傳統(tǒng)的石油工業(yè)產(chǎn)品乙烯聚合而成,但是通過(guò)這一方法獲得的烯烴均為偶數(shù)碳鏈長(zhǎng)度的烯烴。近年來(lái),以可再生的脂肪酸為底物,通過(guò)氧化脫羧合成1-烯烴的方式受到的人們的廣泛關(guān)注�？紤]到自然界中的脂肪酸多以偶數(shù)碳鏈長(zhǎng)度的形式存在,通過(guò)氧化脫羧能夠直接獲得奇數(shù)碳鏈長(zhǎng)度的1-烯烴,從而填補(bǔ)聚乙烯工業(yè)在生產(chǎn)奇數(shù)碳鏈長(zhǎng)度烯烴的空白。但是,脂肪酸氧化脫羧化學(xué)合成方法存在高能耗,高污染等弊端,因此尋找一種環(huán)境友好、低能耗的催化方法成為一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。之前包括我們?cè)趦?nèi)的一些課題組開(kāi)發(fā)了一批酶催化脂肪酸生成1-烯烴的系統(tǒng),但這些系統(tǒng)普遍存在酶催化反應(yīng)活性低的問(wèn)題�；谝吧蚉450BSβ脂肪酸氧化脫羧的催化潛力以及催化脂肪酸羥基化高效的催化效率,我們從P450過(guò)氧化物酶的催化機(jī)制入手,通過(guò)調(diào)節(jié)P450BSβ催化過(guò)程當(dāng)中底物自由基在接近化合物Ⅱ時(shí)“HO·反彈”和“脂肪酸自由基重排脫竣”的比率,提高在催化過(guò)程中底物自由基“脫羧”的選擇性,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)P450BSβ脂肪酸氧化脫羧能力的定向進(jìn)化。首先,基于結(jié)構(gòu)分析我...

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號(hào)和縮寫(xiě)名詞
1 引言
    1.1 研究背景
    1.2 1-烯烴的化學(xué)合成方法
    1.3 1-烯烴的生物合成方法
    1.4 P450酶催化機(jī)理
    1.5 P450SPα、P450BSβ和OleT_JE酶研究基礎(chǔ)
    1.6 脂肪酸脫羧生成烯烴的研究進(jìn)展
    1.7 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 基因
        2.1.2 菌株與載體
        2.1.3 主要酶和化學(xué)試劑
        2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 P450BSβ蛋白的分子構(gòu)建與表達(dá)
        2.2.2 P450BSβ蛋白的大量表達(dá)純化
        2.2.3 P450BSβ突變體蛋白的分子構(gòu)建與表達(dá)
        2.2.4 P450BSβ突變體篩選反應(yīng)體系
        2.2.5 P450BSβ蛋白反應(yīng)體系
        2.2.6 產(chǎn)物鑒定分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 野生型P450BSβ的功能活性鑒定
    3.2 P450BSβ突變體的構(gòu)建
    3.3 P450BSβ突變體的鑒定及篩選
        3.3.1 P450BSβ突變體初篩
        3.3.2 P450BSβ突變體第一輪篩選
        3.3.3 P450BSβ突變體第二輪篩選
        3.3.4 P450BSβ突變體第三輪篩選
        3.3.5 P450BSβ突變體第四輪篩選
    3.4 P450BSβ突變體催化底物范圍的拓展
        3.4.1 P450BSβ突變體反應(yīng)條件的優(yōu)化
        3.4.2 P450BSβ突變體可催化底物的摸索
        3.4.3 P450BSβ突變體GO反應(yīng)體系
        3.4.4 P450BSβ突變體GO反應(yīng)體系中底物的驗(yàn)證
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3957349