1-烯烴作為一種理想的下一代能源物質(zhì)以及重要的化工原料,其合成方式受到廣泛的關(guān)注。目前,這些烯烴主要通過從傳統(tǒng)的石油工業(yè)產(chǎn)品乙烯聚合而成,但是通過這一方法獲得的烯烴均為偶數(shù)碳鏈長度的烯烴。近年來,以可再生的脂肪酸為底物,通過氧化脫羧合成1-烯烴的方式受到的人們的廣泛關(guān)注。考慮到自然界中的脂肪酸多以偶數(shù)碳鏈長度的形式存在,通過氧化脫羧能夠直接獲得奇數(shù)碳鏈長度的1-烯烴,從而填補聚乙烯工業(yè)在生產(chǎn)奇數(shù)碳鏈長度烯烴的空白。但是,脂肪酸氧化脫羧化學合成方法存在高能耗,高污染等弊端,因此尋找一種環(huán)境友好、低能耗的催化方法成為一個亟待解決的問題。之前包括我們在內(nèi)的一些課題組開發(fā)了一批酶催化脂肪酸生成1-烯烴的系統(tǒng),但這些系統(tǒng)普遍存在酶催化反應(yīng)活性低的問題�；谝吧蚉450BSβ脂肪酸氧化脫羧的催化潛力以及催化脂肪酸羥基化高效的催化效率,我們從P450過氧化物酶的催化機制入手,通過調(diào)節(jié)P450BSβ催化過程當中底物自由基在接近化合物Ⅱ時“HO·反彈”和“脂肪酸自由基重排脫竣”的比率,提高在催化過程中底物自由基“脫羧”的選擇性,進而實現(xiàn)對P450BSβ脂肪酸氧化脫羧能力的定向進化。首先,基于結(jié)構(gòu)分析我...

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要符號和縮寫名詞
1 引言
    1.1 研究背景
    1.2 1-烯烴的化學合成方法
    1.3 1-烯烴的生物合成方法
    1.4 P450酶催化機理
    1.5 P450SPα、P450BSβ和OleT_JE酶研究基礎(chǔ)
    1.6 脂肪酸脫羧生成烯烴的研究進展
    1.7 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 基因
        2.1.2 菌株與載體
        2.1.3 主要酶和化學試劑
        2.1.4 主要實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 P450BSβ蛋白的分子構(gòu)建與表達
        2.2.2 P450BSβ蛋白的大量表達純化
        2.2.3 P450BSβ突變體蛋白的分子構(gòu)建與表達
        2.2.4 P450BSβ突變體篩選反應(yīng)體系
        2.2.5 P450BSβ蛋白反應(yīng)體系
        2.2.6 產(chǎn)物鑒定分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 野生型P450BSβ的功能活性鑒定
    3.2 P450BSβ突變體的構(gòu)建
    3.3 P450BSβ突變體的鑒定及篩選
        3.3.1 P450BSβ突變體初篩
        3.3.2 P450BSβ突變體第一輪篩選
        3.3.3 P450BSβ突變體第二輪篩選
        3.3.4 P450BSβ突變體第三輪篩選
        3.3.5 P450BSβ突變體第四輪篩選
    3.4 P450BSβ突變體催化底物范圍的拓展
        3.4.1 P450BSβ突變體反應(yīng)條件的優(yōu)化
        3.4.2 P450BSβ突變體可催化底物的摸索
        3.4.3 P450BSβ突變體GO反應(yīng)體系
        3.4.4 P450BSβ突變體GO反應(yīng)體系中底物的驗證
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
攻讀碩士學位期間取得的研究成果
致謝



本文編號：3957349