HaTRET1基因的克隆及轉基因煙草的耐旱性分析
發(fā)布時間:2024-04-15 02:36
海藻糖對多種生物尤其是對某些極端耐受脫水的昆蟲具有重要的保護作用,而海藻糖轉運蛋白(trehalose transporter1, TRET1)在促進海藻糖的運輸、分配中起關鍵作用。為了探究TRET1在植物抗干旱脅迫中的作用,本研究通過RT-PCR (Reverse transcription-polymerase chain reaction)克隆得到棉鈴蟲(Helicoverpa armigera)海藻糖轉運蛋白基因HaTRET1,將其轉化煙草并鑒定,分別對轉基因煙草和野生型煙草進行抗旱性分析。結果顯示干旱脅迫下所有煙草植株脯氨酸(proline, Pro)和丙二醛(maleic dialdehyde, MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和過氧化物酶(peroxidase, POD)活性均增加;其中轉基因株系Pro、SOD和POD活性的增加量顯著高于非轉基因植株,而轉基因株系中MDA的增加量顯著低于非轉基因植株。另外,在干旱脅迫下轉基因煙草種子的發(fā)芽率(約為60%~70%)遠高于野生型(<20%);轉基因煙草葉片相對含水量和葉綠...
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本文編號:3955603
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圖1不同處理時間HaTRET1基因的相對表達量
通過RT-PCR方法從棉鈴蟲幼蟲cDNA中擴增得到一段1556bp的序列并將其連接至T載體,經(jīng)測序及序列分析發(fā)現(xiàn)該序列包含一個1449bp的ORF(Openreadingframe)(命名為HaTRET1),與棉鈴蟲Tret1-like(GenBank登錄號....
圖3HaTRET1跨膜螺旋結構分布
實驗結果表明,水分充足和干旱條件下,轉基因煙草的葉綠素含量均高于野生型(圖10)。干旱脅迫下所有煙草的葉綠素含量均下降,但野生型煙草含量下降幅度顯著大于轉基因型,且轉基因煙草中葉綠素a、葉綠素b和總葉綠素的含量均大于野生型。說明干旱對轉基因煙草細胞光合器官的損傷程度較小。圖2H....
圖2HaTRET1與棉鈴蟲Tret1-like蛋白氨基酸序列對比
圖3HaTRET1跨膜螺旋結構分布圖4HaTRET1N-糖基化位點分布
圖4HaTRET1N-糖基化位點分布
圖2HaTRET1與棉鈴蟲Tret1-like蛋白氨基酸序列對比1.3.4干旱脅迫對煙草中Pro、MDA含量以及SOD、POD活性的影響
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