二氫槲皮素(Dihydroquercetin,DHQ)作為一種重要的黃酮類物質(zhì),是一種比較稀缺的天然強效抗氧化劑,可有效去除人體內(nèi)的自由基與毒素,具有抗氧化、抗腫瘤、抗病毒和調(diào)節(jié)免疫力等重要生物活性,是食品、醫(yī)藥和保健品領(lǐng)域的珍貴原料,而植物提取和化學(xué)合成的產(chǎn)率較低且不環(huán)保。目前,已能利用大腸桿菌和工程酵母等微生物合成二氫黃酮、黃酮、異黃酮、黃酮醇、花色素和黃烷酮等黃酮類化合物,為DHQ的生物合成提供了理論支持。本研究應(yīng)用合成生物學(xué)的方法,在原核和真核表達系統(tǒng)中將DHQ合成途徑中的植物源關(guān)鍵基因(F3H、F3’H)進行異源表達,并進行條件優(yōu)化,最終微生物合成天然產(chǎn)物DHQ。通過基因篩選和優(yōu)化后,人工合成具有大腸桿菌密碼子偏好性的3種不同植物來源的黃酮3-羥化酶基因(CsF3H、GbF3H、GmF3H)和類黃酮3’-羥化酶基因(CsF3’H、GbF3’H、GmF3’H)以及2種細胞色素P450還原酶基因(ATR、CPR),并分別構(gòu)建單基因表達載體和多基因共表達載體pETM6-F3H-F3’H-ATR/CPR。將重組表達載體轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3)感受態(tài)細胞,構(gòu)建大腸桿菌工程菌...

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1-1二氫槲皮素分子式Fig.1-1Molecularformulaofdihydroquercetin

?匭裕∟AKAYAMAetal.,1993;MAROZIENetal.,2000;YUNetal.,2000;HARAGUCHIetal.,2014）、調(diào)節(jié)酶活（SUetal.,2019;SUetal.,2020）等多種生物活性。因此它在食品、藥品、化妝品以及工業(yè)領(lǐng)域均有廣泛的應(yīng)....

圖1-2二氫槲皮素的生物合成途徑Fig.1-2Biosynthesisofdihydroquercetin

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第一章緒論7的催化下生成柚皮素。類黃酮途徑中，柚皮素在黃烷酮3-羥化酶（Flavanone3-hydroxylase，F(xiàn)3H）的催化下生成二氫黃酮醇類物質(zhì)。二氫槲皮素可由二氫黃酮醇經(jīng)類黃烷酮3’-羥化酶（Flavanone3’-hydroxylase，F(xiàn)....

圖2-2CsF3H、GbF3H、GmF3H的SignalP5.0信號肽預(yù)測結(jié)果

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章F3H和F3’H的生物信息學(xué)分析132.3.1.3F3H蛋白質(zhì)信號肽和跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測利用SignalP5.0Server服務(wù)器進行信號肽預(yù)測（圖2-2），結(jié)果表明這3種F3H蛋白均不含有信號肽，屬于非分泌蛋白。（a）CsF3H（b）GbF3H（c）....

圖2-3CsF3H、GbF3H、GmF3H的TMHMM預(yù)測結(jié)果

中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文第二章F3H和F3’H的生物信息學(xué)分析132.3.1.3F3H蛋白質(zhì)信號肽和跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測利用SignalP5.0Server服務(wù)器進行信號肽預(yù)測（圖2-2），結(jié)果表明這3種F3H蛋白均不含有信號肽，屬于非分泌蛋白。（a）CsF3H（b）GbF3H（c）....

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