以乙酰乳酸合成酶為靶標的除草劑具有用量少、選擇性強、殺草譜廣等特點,在田間被廣泛應用。本研究前期篩選到一株抗咪唑啉酮類除草劑"普施特"的水稻植株,并通過克隆獲得了目的基因OsALS,序列分析發(fā)現(xiàn)OsALS基因的第627位點發(fā)生了突變。本研究為進一步研究突變的OsALS基因與水稻抗除草劑活性之間的關系,將OsALS構建到了p CAMBIA1301載體上,獲得了轉OsALS基因的浮萍并進行了轉基因浮萍對除草劑的活性分析。研究結果表明,OsALS基因中627位點的突變很可能是導致轉基因浮萍對除草劑"普施特"產生抗性的重要原因,研究結果為水稻種質資源和除草劑的開發(fā)提供了重要支持。

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圖1OsALS基因過表達載體構建圖

為了研究OsALS基因對除草劑抗性的影響，筆者使用35S啟動子驅動OsALS基因，使其過量表達，將其連入雙元表達載體pCAMBIA1301中獲得完整的表達盒35S:ALS:ployA，并將該雙元載體導入農桿菌EHA105中。使用農桿菌介導的轉化方法轉化浮萍，以達到在浮萍中過表達O....

圖3侵染浮萍的再生過程

按照課題組建立的遺傳轉化方法，用EHA105-pCAMBIA1301-ALS菌株對浮萍愈傷組織進行了侵染，經恢復和再生培養(yǎng)等過程，獲得5個再生株系，筆者對其中4個進行了鑒定和抗性篩選。完整的再生過程如圖3所示。為獲得轉化株系，首先采用潮霉素（Hyg）進行了抗性篩選，使用不同濃度....

圖4Hyg篩選不同株系8d時的表型

為獲得轉化株系，首先采用潮霉素（Hyg）進行了抗性篩選，使用不同濃度的Hyg對再生植株進行篩選，并用非轉基因浮萍（WT）作為對照。結果顯示，當濃度為1.0mg·L-1時，WT幾乎全部死亡。隨著Hyg濃度升高，再生植株的生長狀態(tài)越來越差，對Hyg的抗性越來越低，當Hyg濃度為2.....

圖5抗性株系的基因組PCR產物電泳檢測結果

為進一步對抗性株系進行鑒定，采用了基因組PCR檢測及測序驗證。首先，用SDS法提取野生型株系和轉基因抗性株系總基因組DNA。PCR結果顯示，4個抗性株系均有目的基因條帶，而WT株系未有擴增條帶，結果如圖5所示，并將4個株系DNA擴增產物進行測序。測序結果中，錯誤匹配點為克隆ALS....

本文編號：3936646