發(fā)布時間：2024-03-12 19:01

　　目的通過腺病毒(Ad)載體感染過表達骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(BMP-4),研究BMP-4對兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)體外增殖和成軟骨的影響。方法全骨髓貼壁法分離獲取BMSCs,傳代培養(yǎng)提升細(xì)胞純度,通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)及流式細(xì)胞術(shù)測定表面分子標(biāo)志物以鑒定細(xì)胞;設(shè)立病毒感染復(fù)數(shù)(MOI)梯度組,通過倒置相差顯微鏡和流式細(xì)胞儀確定最佳MOI;酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)及蛋白印跡法分析過表達BMP-4對細(xì)胞分泌Ⅱ型膠原(COLLⅡ),性別決定基因盒9(Sox9)和BMP-4的影響;細(xì)胞計數(shù)試劑盒8(CCK-8)法鑒定過表達BMP-4對BMSCs體外增殖的影響。結(jié)果原代細(xì)胞呈圓形、橢圓和梭形不等,第2代細(xì)胞呈典型成纖維樣長梭形,漩渦狀分布,低表達造血干細(xì)胞表面分子標(biāo)志物CD34(1.94%)和CD45(2.13%),高表達CD44(98.2%)、CD29(99.7%)和CD90(98.8%)。MOI為100時,病毒感染效率較高,且對細(xì)胞損傷最小,為最適MOI。與對照組相比,過表達BMP-4能顯著促進BMSCs的增殖,并能分泌成軟骨特異指標(biāo)COLLⅡ、BMP-4及Sox9(P<0.05)。結(jié)...

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本文編號：3926730