發(fā)布時(shí)間：2024-03-07 19:05

　　通過同源克隆法獲得煙草抗病基因同源序列(RGAs),為煙草抗病基因的篩選和相關(guān)研究提供幫助。基于抗病基因的NBS-LRR保守結(jié)構(gòu)域,篩選并合成了3對(duì)簡(jiǎn)并引物,擴(kuò)增煙草中的NBS-LRR類抗病基因。獲得了4條與抗病基因具有高度同源性的NBS-LRR類煙草抗病基因同源序列(TRGA,登錄號(hào):MK634316,MK634317, MK634318, MK634319),目的片段大小均在500 bp左右;BLAST X分析表明,獲得的4個(gè)煙草RGAs與已知RGAs具有高度相似性,氨基酸相似性為97%～100%;聚類分析將其分成2大類,包括TIRNBS-LRR和non-TIR-NBS-LRR兩類抗病基因,其編碼氨基酸序列含有NBS保守區(qū)的典型特征基序。通過簡(jiǎn)并引物進(jìn)行同源擴(kuò)增是分離煙草RGAs的有效方法,可為進(jìn)一步抗病基因篩選及抗病分子育種奠定基礎(chǔ)。

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【部分圖文】：

圖1NBS-LRR類抗病基因保守序列結(jié)構(gòu)

采用3對(duì)簡(jiǎn)并引物(表1)，對(duì)煙草DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將所得PCR產(chǎn)物經(jīng)回收、克隆，然后進(jìn)行菌落PCR篩選后測(cè)序，得到5條與已知抗病基因具有高度同源性的NBS-LRR類煙草抗病基因同源序列(tobaccoresistancegeneanalogs,TRGA)，目的片段大小均....

圖2簡(jiǎn)并引物用于煙草RGAs的擴(kuò)增電泳檢測(cè)

圖1NBS-LRR類抗病基因保守序列結(jié)構(gòu)1.2煙草RGAs與已知R基因的同源性分析

圖3煙草RGAs氨基酸序列比對(duì)分析

利用DNAMAN軟件對(duì)得到的測(cè)序結(jié)果經(jīng)行翻譯和多重序列比對(duì)分析(圖3)，分別與GenBank中登錄的擬南芥RPM1(X87851)，煙草N(AAA50763)，亞麻L(zhǎng)6(AAA91022)，番茄PRF(U65391)及水稻Xa-1(BAA25068)等植物R基因進(jìn)行氨基酸同源性比....

圖4煙草RGAs氨基酸序列與已知植物R基因NBS區(qū)域的聚類分析

Meyers等(1999)報(bào)道顯示通過Kinase-2結(jié)構(gòu)域最后一個(gè)氨基酸基序可以區(qū)分nonTIR-NBS-LRR和TIR-NBS-LRR類基因，如果最后一個(gè)氨基酸為天冬氨酸(D)，則為TIR-NBS-LRR類基因；如果為色氨酸(W)，則為nonTIR-NBS-LRR類基因，準(zhǔn)確....

本文編號(hào)：3921601