目的:探討C57BL6小鼠支氣管肺泡干細(xì)胞(BASCSs)體外分離、鑒定及其三維培養(yǎng)體系的構(gòu)建方法,為進(jìn)一步研究BASCSs的相關(guān)特性奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:選用C57BL6成年雄鼠,完整分離肺組織,1×PBS灌洗后,經(jīng)支氣管分次灌注Elastase酶進(jìn)行消化,以銳器切碎肺組織,加入DNA酶使細(xì)胞更好地分散開。用75μm細(xì)胞篩去除未消化的組織塊,所得細(xì)胞懸液以熒光標(biāo)記的CD31、CD34、CD45、SCA-1、 EpCAM抗體染色,流式細(xì)胞儀分選CD31^-CD34^-CD45^-SCA-1⁺EpCAM⁺細(xì)胞,細(xì)胞與Mlg2908細(xì)胞(小鼠肺成纖維細(xì)胞株)按(1×10³)∶(1×10⁶)的比例混合,以Matrigel為基質(zhì)構(gòu)建三維培養(yǎng)體系。結(jié)果:通過Elastase酶消化肺組織,每只成年小鼠可得到有核細(xì)胞總數(shù)(1.6～1.8)×10⁷個,流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果顯示,CD34^- CD45^-

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 小鼠支氣管干細(xì)胞的體外分離與鑒定[11-15]
        1.2.2 小鼠支氣管干細(xì)胞的三維培養(yǎng)[12,16-17]
2 結(jié)果
    2.1 BASCs分離結(jié)果
    2.2 支氣管肺泡干細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果
3 討論
    3.1 關(guān)于消化方法的選擇
    3.2 細(xì)胞分離技巧
    3.3 關(guān)于紅細(xì)胞的去除
    3.4 細(xì)胞三維培養(yǎng)技巧



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