盤基網(wǎng)柄菌(Dictyostelium discoideum)是一個(gè)應(yīng)用廣泛的模式生物,非常適合用來研究胞質(zhì)分裂、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、吞噬作用、趨化性、趨電性、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及個(gè)體發(fā)育過程中的細(xì)胞分化。該實(shí)驗(yàn)主要介紹電穿孔技術(shù)轉(zhuǎn)化綠色熒光蛋白標(biāo)記肌動(dòng)蛋白基因質(zhì)粒(Lifeact-GFP)進(jìn)入盤基網(wǎng)柄菌活細(xì)胞中,抗性篩選(潮霉素B)獲得陽性克隆子,最后借助熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白標(biāo)記的微絲在盤基網(wǎng)柄菌的分布情況。綜合性實(shí)驗(yàn)訓(xùn)練可提高學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣和綜合運(yùn)用理論知識的能力,進(jìn)而可培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)研究思維。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

圖1實(shí)驗(yàn)流程圖

盤基網(wǎng)柄菌細(xì)胞的培養(yǎng),不需要借助昂貴的實(shí)驗(yàn)設(shè)備,在標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室就可以開展。因此,本文主要介紹本科學(xué)生細(xì)胞生物學(xué)綜合性實(shí)驗(yàn)教學(xué)設(shè)計(jì)的主要內(nèi)容,簡述如下:以盤基網(wǎng)柄菌單細(xì)胞(AX2)階段為材料,通過電穿孔(electroporation)技術(shù)將表達(dá)綠色熒光蛋白的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化(....

圖2Lifeact-綠色熒光蛋白在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)前端的分布

在倒置熒光顯微鏡下,可以觀察到綠色熒光蛋白在細(xì)胞膜上的分布情況(圖2)。對于隨機(jī)運(yùn)動(dòng)的細(xì)胞,綠色熒光蛋白會隨細(xì)胞運(yùn)動(dòng)方向的改變而改變,但始終是在細(xì)胞前進(jìn)方向的前端分布,即偽足部位分布較多。營養(yǎng)狀態(tài)下的盤基網(wǎng)柄菌細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力相對較弱,如果想觀察理想的運(yùn)動(dòng)情況,可以將細(xì)胞....

本文編號：3907045