【目的】利用轉(zhuǎn)錄激活樣效應(yīng)因子核酸酶(TALEN)系統(tǒng)獲得Tiki1基因敲除的兔模型,為研究Tiki1對(duì)動(dòng)物早期發(fā)育作用機(jī)理提供兔源的動(dòng)物模型�！痉椒ā炕赥ALEN系統(tǒng)設(shè)計(jì)了靶向兔Tiki1基因的打靶載體,分別將10和50 ng/μL的Tiki1-TALEN mRNA注射到原核期的家兔受精卵胞質(zhì)中,然后收集發(fā)育至囊胚期的胚胎,鑒定囊胚率和基因修飾效率,通過(guò)測(cè)序檢驗(yàn)?zāi)遗叩幕蛲蛔儭榱诉M(jìn)一步獲得Tiki1基因敲除兔,后續(xù)將50 ng/μL的Tiki1-TALEN mRNA注射到17個(gè)原核期的家兔受精卵胞質(zhì)中,將受精卵分別移植到2只受體兔體內(nèi)。【結(jié)果】注射50 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA試驗(yàn)組的囊胚率(64%)與注射10 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA試驗(yàn)組的囊胚率(57%)差異不大,但注射50 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA試驗(yàn)組的囊胚基因修飾效率(100%)顯著高于注射10 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA試驗(yàn)組的囊胚基因修飾效率(14.3%)。測(cè)序結(jié)果表明,Tiki1基因的突變范圍從1到28 bp缺失不等。經(jīng)過(guò)胚胎移植共生出...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料和試劑
    1.2 TALEN質(zhì)粒設(shè)計(jì)與構(gòu)建
        1.2.1 TALEN質(zhì)粒設(shè)計(jì)
        1.2.2 TALEN的合成與組裝
        1.2.3 轉(zhuǎn)化
        1.2.4 體外轉(zhuǎn)錄
        1.2.5 RNA加尾修飾
        1.2.6 RNA產(chǎn)物回收
        1.2.7 TALEN的打靶效率檢測(cè)
    1.3 兔受精卵的顯微注射
        1.3.1 母兔的超排和受精卵的收集
        1.3.2顯微操作針的制備
        1.3.3 受精卵的RNA顯微注射
    1.4 囊胚基因型打靶結(jié)果的鑒定
    1.5 Tiki1基因敲除兔的制備
2 結(jié)果與分析
    2.1 Tiki1基因TALEN靶位點(diǎn)的設(shè)計(jì)
    2.2 注射Tiki1-TALENs mRNA后家兔受精胚的體外發(fā)育結(jié)果
    2.3 注射Tiki1-TALEN mRNA后家兔受精卵Tiki1基因修飾情況
    2.4 注射胚胎移植受體懷孕和仔兔出生結(jié)果
3 討論與結(jié)論



本文編號(hào)：3890943