【目的】利用轉錄激活樣效應因子核酸酶(TALEN)系統(tǒng)獲得Tiki1基因敲除的兔模型,為研究Tiki1對動物早期發(fā)育作用機理提供兔源的動物模型�！痉椒ā炕赥ALEN系統(tǒng)設計了靶向兔Tiki1基因的打靶載體,分別將10和50 ng/μL的Tiki1-TALEN mRNA注射到原核期的家兔受精卵胞質中,然后收集發(fā)育至囊胚期的胚胎,鑒定囊胚率和基因修飾效率,通過測序檢驗囊胚的基因突變。為了進一步獲得Tiki1基因敲除兔,后續(xù)將50 ng/μL的Tiki1-TALEN mRNA注射到17個原核期的家兔受精卵胞質中,將受精卵分別移植到2只受體兔體內�！窘Y果】注射50 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA試驗組的囊胚率(64%)與注射10 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA試驗組的囊胚率(57%)差異不大,但注射50 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA試驗組的囊胚基因修飾效率(100%)顯著高于注射10 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA試驗組的囊胚基因修飾效率(14.3%)。測序結果表明,Tiki1基因的突變范圍從1到28 bp缺失不等。經(jīng)過胚胎移植共生出...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料和試劑
    1.2 TALEN質粒設計與構建
        1.2.1 TALEN質粒設計
        1.2.2 TALEN的合成與組裝
        1.2.3 轉化
        1.2.4 體外轉錄
        1.2.5 RNA加尾修飾
        1.2.6 RNA產(chǎn)物回收
        1.2.7 TALEN的打靶效率檢測
    1.3 兔受精卵的顯微注射
        1.3.1 母兔的超排和受精卵的收集
        1.3.2顯微操作針的制備
        1.3.3 受精卵的RNA顯微注射
    1.4 囊胚基因型打靶結果的鑒定
    1.5 Tiki1基因敲除兔的制備
2 結果與分析
    2.1 Tiki1基因TALEN靶位點的設計
    2.2 注射Tiki1-TALENs mRNA后家兔受精胚的體外發(fā)育結果
    2.3 注射Tiki1-TALEN mRNA后家兔受精卵Tiki1基因修飾情況
    2.4 注射胚胎移植受體懷孕和仔兔出生結果
3 討論與結論



本文編號：3890943