發(fā)布時(shí)間：2023-12-13 18:16

　　在動(dòng)物體內(nèi)特定的細(xì)胞群體中進(jìn)行時(shí)空特異性的遺傳學(xué)研究是生物學(xué)一直以來的難題。位點(diǎn)特異性重組酶,尤其是酪氨酸重組酶家族的Cre重組酶,因其重組效率高且特異性強(qiáng),被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞標(biāo)記和基因功能研究。然而單個(gè)重組酶系統(tǒng)具有一定的局限性很難用于研究復(fù)雜的生物學(xué)問題。而Dre重組酶與Cre重組酶具有高度同源性且不會(huì)與其發(fā)生交叉反應(yīng),因此常與Cre重組酶聯(lián)合使用。目前已有的多種誘導(dǎo)型Dre重組酶,均為化學(xué)誘導(dǎo)系統(tǒng)。雖然它們能夠嚴(yán)謹(jǐn)?shù)卣{(diào)控基因表達(dá),但缺乏空間特異性、誘導(dǎo)周期長、效率低且會(huì)擾亂內(nèi)源信號(hào)通路而光誘導(dǎo)系統(tǒng)是一種時(shí)空特異性高且安全高效易調(diào)節(jié)的基因表達(dá)調(diào)控工具。因此本論文旨在構(gòu)建光激活的Dre重組酶(photoactivatable Dre,PA-Dre)系統(tǒng)及Cre激活的光誘導(dǎo)Dre(Cre-Activated Light Inducible Dre,CALID)系統(tǒng)并在體內(nèi)特定的細(xì)胞群體中實(shí)現(xiàn)時(shí)空特異性的基因調(diào)控。首先,借助分子動(dòng)力學(xué)模擬,我們獲得了多個(gè)Dre重組酶的分段位點(diǎn)。經(jīng)過一系列篩選發(fā)現(xiàn)Dre N₆₀/Dre C₆₁,Dre N_...

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 位點(diǎn)特異性重組酶的研究進(jìn)展
        1.1.1 酪氨酸重組酶的發(fā)展史
        1.1.2 誘導(dǎo)型酪氨酸重組酶
        1.1.3 酪氨酸重組酶的應(yīng)用
    1.2 光遺傳學(xué)概述
        1.2.1 光遺傳學(xué)的發(fā)展歷程
        1.2.2 光遺傳學(xué)工具
        1.2.3 光遺傳學(xué)工具的應(yīng)用
    1.3 本課題的選題依據(jù)及意義
第二章 PA-Dre系統(tǒng)的構(gòu)建、優(yōu)化及其特點(diǎn)表征
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 試劑配方
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 PA-Dre系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與構(gòu)建
        2.3.2 PA-Dre系統(tǒng)的優(yōu)化
        2.3.3 PA-Dre系統(tǒng)的特點(diǎn)
    2.4 小結(jié)
第三章 利用PA-Dre系統(tǒng)在小鼠體內(nèi)時(shí)空特異性地激活基因表達(dá)
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 試劑配方
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 利用PA-Dre系統(tǒng)在小鼠體內(nèi)激活外源基因表達(dá)
        3.3.2 利用PA-Dre系統(tǒng)在小鼠體內(nèi)激活內(nèi)源基因表達(dá)
    3.4 小結(jié)
第四章 利用CALID系統(tǒng)在小鼠腦部實(shí)現(xiàn)細(xì)胞類型特異性的標(biāo)記
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 試劑配方
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 CALID系統(tǒng)的設(shè)計(jì)與構(gòu)建
        4.3.2 利用CALID系統(tǒng)標(biāo)記興奮性神經(jīng)元
        4.3.3 利用CALID系統(tǒng)標(biāo)記抑制性神經(jīng)元
    4.4 小結(jié)
第五章 總結(jié)與討論
參考文獻(xiàn)
附錄
研究成果
致謝



本文編號(hào)：3873704