發(fā)布時間：2023-11-30 17:21

　　【背景】工業(yè)菌株的耐酸能力是發(fā)酵過程中的一大挑戰(zhàn)。粘質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)作為腸桿菌科的一種細菌,可生成2,3-丁二醇、乙偶姻和靈菌紅素等高附加值產(chǎn)品。然而目前對于粘質(zhì)沙雷氏菌酸耐受能力的分子機制尚不清楚�！灸康摹客ㄟ^對轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子XrpA的挖掘以及對其功能的研究,探究粘質(zhì)沙雷氏菌酸耐受能力的分子機制,為改善工業(yè)菌株耐酸能力提供新的策略�！痉椒ā客ㄟ^對粘質(zhì)沙雷氏菌進行轉(zhuǎn)座子插入突變,構(gòu)建了一個Tn5G轉(zhuǎn)座子插入突變文庫,利用文庫篩選了一株酸敏感型突變株,并對其進行測序鑒定;同時還對突變菌株中與耐酸相關(guān)關(guān)鍵基因的轉(zhuǎn)錄水平以及細胞膜通透性、細胞膜完整性和H+-ATPase的活性變化進行檢測。【結(jié)果】發(fā)現(xiàn)了一個響應(yīng)酸脅迫的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子BVG90₂3400,其屬于XRE超級家族轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,命名為XrpA。在酸性條件下,與野生型菌株(JNB5-1)相比,xrpA被阻斷后導(dǎo)致了粘質(zhì)沙雷氏菌多種表型的變化,其中包括生物量顯著下降、H+-ATPase活性降低、細胞膜的通透性以及完整性受到破壞�！窘Y(jié)論】XrpA影響粘質(zhì)沙雷氏菌耐酸能力的分子機制是通過...

【文章頁數(shù)】：13 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和質(zhì)粒
        1.1.2 主要試劑和儀器
        1.1.3 培養(yǎng)基
    1.2 實驗方法
        1.2.1 細菌培養(yǎng)條件
        1.2.2 轉(zhuǎn)座子插入突變文庫的構(gòu)建以及突變菌株的篩選
        1.2.3 平板生長實驗
        1.2.4 細胞存活率分析
        1.2.5 轉(zhuǎn)座子插入位點的鑒定
        1.2.6 RT-q PCR對基因轉(zhuǎn)錄水平的分析
        1.2.7 細胞膜完整性分析
        1.2.8 細胞膜通透性分析
        1.2.9 質(zhì)子泵H+-ATPase活性的測定
        1.2.1 0 Xrp A同源蛋白多序列比對分析
        1.2.1 1 CRISPR/Cas介導(dǎo)的E.coli中sfs B的敲除
2 結(jié)果與分析
    2.1 控制粘質(zhì)沙雷氏菌低p H耐受能力轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Xrp A的發(fā)現(xiàn)
    2.2 Xrp A顯著影響粘質(zhì)沙雷氏菌的耐受酸脅迫能力
    2.3 RT-q PCR驗證突變菌株中與耐酸能力相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平變化
    2.4 Xrp A為維持粘質(zhì)沙雷氏菌細胞膜通透性和完整性所必需
    2.5 Xrp A在維持細胞膜H+-ATPase活性中的作用
    2.6 Xrp A-like蛋白參與調(diào)控大腸桿菌耐酸能力
3 討論與結(jié)論



本文編號：3868884