LRH-1(肝臟受體同源物-1)又名NR5A2,是核受體家族的成員之一,作為轉(zhuǎn)錄激活子調(diào)控類固醇基因的表達(dá),對(duì)類固醇激素的分泌及癌癥因子的調(diào)控有重要作用。雌性哺乳動(dòng)物的大多數(shù)卵泡都會(huì)發(fā)生閉鎖,激素的調(diào)控也是卵泡閉鎖的因素之一,而顆粒細(xì)胞的凋亡被認(rèn)為是卵泡閉鎖的主要機(jī)制,但LRH-1是否參與牛卵巢顆粒細(xì)胞的增殖凋亡調(diào)控仍需證實(shí)。越來(lái)越多研究表明孕酮受體PGR介導(dǎo)細(xì)胞的抗凋亡信號(hào)通路,孕酮(P₄)對(duì)雌性動(dòng)物生殖組織的作用也是由PGR介導(dǎo)的。孕酮受體信號(hào)途徑參與了卵巢發(fā)情周期和黃體化,并調(diào)控機(jī)體的卵巢發(fā)育、妊娠等重要活動(dòng)。同時(shí)也與一些疾病,包括阿爾茨海默癥、帕金森等密切相關(guān)。但目前未見有關(guān)LRH-1介導(dǎo)牛卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡的相關(guān)報(bào)道,其調(diào)控機(jī)制也是未知的。通過(guò)特異性的小分子激活劑(DLPC(Dilauroyl Phosphatidylcholine)和P₄)激活LRH-1的表達(dá)和孕酮受體信號(hào)通路相關(guān)受體的表達(dá),利用免疫組織化學(xué)、RT-qPCR、Western blot、ELISA、免疫熒光細(xì)胞法、Annexin V-FITC/PI及CCK-8等多種...

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 哺乳動(dòng)物卵泡發(fā)育機(jī)制
        1.1.1 卵子的發(fā)生與卵泡發(fā)育
        1.1.2 卵泡的發(fā)育調(diào)控機(jī)制
        1.1.3 卵泡的閉鎖研究進(jìn)展
    1.2 LRH-1 與類固醇激素分泌
        1.2.1 LRH-1 與類固醇激素的作用及機(jī)理
        1.2.2 卵泡類固醇合成機(jī)制
    1.3 孕酮受體信號(hào)通路對(duì)凋亡的影響
第二章 顆粒細(xì)胞培養(yǎng)鑒定及LRH-1 在卵巢組織中的表達(dá)定位
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 牛卵巢的采集
        2.1.2 主要試劑與儀器設(shè)備
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 免疫組織化學(xué)
        2.2.2 牛卵巢顆粒細(xì)胞分離培養(yǎng)及鑒定
    2.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 LRH-1 在牛卵巢組織中的定位
        2.3.2 牛卵巢顆粒細(xì)胞鑒定
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第三章 LRH-1 的小分子激活劑DLPC對(duì)牛卵巢顆粒細(xì)胞類固醇激素分泌的作用
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 牛卵巢的采集
        3.1.2 主要試劑與儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 牛卵巢的采集
        3.2.2 小分子激活劑DLPC處理牛卵巢顆粒細(xì)胞
        3.2.3 牛卵巢顆粒細(xì)胞總RNA提取及RT-qPCR
        3.2.4 牛卵巢顆粒細(xì)胞蛋白的提取及Western-bolt檢測(cè)方法
        3.2.5 ELISA檢測(cè)牛顆粒細(xì)胞類固醇的激素分泌
    3.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.3.1 DLPC對(duì)牛顆粒細(xì)胞LRH-1 基因及蛋白表達(dá)的影響
        3.3.2 激活劑DLPC對(duì)牛顆粒細(xì)胞類固醇激素分泌的影響
        3.3.3 激活劑DLPC對(duì)牛卵巢顆粒細(xì)胞類固醇受體基因表達(dá)的影響
        3.3.4 激活劑DLPC對(duì)牛卵巢顆粒細(xì)胞類固醇合成途徑相關(guān)基因表達(dá)的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第四章 LRH-1 的激活劑DLPC對(duì)牛卵巢顆粒細(xì)胞增殖及凋亡的影響
    4.1 試驗(yàn)材料與方法
        4.1.1 主要儀器設(shè)備
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 牛卵巢的采集
        4.1.4 小分子激活劑DLPC處理牛卵巢顆粒細(xì)胞
        4.1.5 體外培養(yǎng)牛卵巢顆粒細(xì)胞
        4.1.6 牛卵巢顆粒細(xì)胞蛋白的提取及Western-bolt檢測(cè)方法
        4.1.7 牛卵巢顆粒細(xì)胞增殖活力檢測(cè)
        4.1.8 Annexin V-FITC/PI檢測(cè)牛卵巢顆粒細(xì)胞凋亡
        4.1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.2 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.2.1 LRH-1 對(duì)牛卵巢顆粒細(xì)胞PPARγ蛋白表達(dá)的影響
        4.2.2 不同濃度的DLPC對(duì)牛卵巢顆粒細(xì)胞增殖的影響
        4.2.3 LRH-1 對(duì)牛卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的影響
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第五章 LRH-1 通過(guò)孕酮受體信號(hào)通路調(diào)節(jié)牛卵巢顆粒細(xì)胞凋亡
    5.1 材料與方法
        5.1.1 主要試劑與儀器設(shè)備
        5.1.2 牛卵巢的采集與分離培養(yǎng)
        5.1.3 DLPC和 P₄ 處理牛卵巢顆粒細(xì)胞
        5.1.4 牛卵巢顆粒細(xì)胞增殖活力檢測(cè)
        5.1.5 免疫熒光檢測(cè)牛卵巢顆粒細(xì)胞孕酮相關(guān)受體的表達(dá)
        5.1.6 Annexin V-FITC/PI檢測(cè)牛卵巢顆粒細(xì)胞凋亡
        5.1.7 牛卵巢顆粒細(xì)胞總蛋白的提取與Western blot
        5.1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.2 試驗(yàn)結(jié)果與分析
        5.2.1 LRH-1 對(duì)牛卵巢顆粒細(xì)胞PGR基因表達(dá)的影響
        5.2.2 LRH-1 對(duì)牛卵巢顆粒細(xì)胞孕酮受體信號(hào)途徑相關(guān)蛋白的影響
        5.2.3 DLPC與P₄對(duì)牛卵巢顆粒細(xì)胞增殖的作用
        5.2.4 LRH-1 通過(guò)孕酮受體信號(hào)途徑調(diào)節(jié)牛卵巢顆粒細(xì)胞凋亡
        5.2.5 LRH-1與P₄對(duì)牛卵巢顆粒細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)的作用
    5.3 討論
    5.4 小結(jié)
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
附錄
參考文獻(xiàn)
主要符號(hào)對(duì)照表
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3867268