目的:之前我們已經(jīng)證明FABP3抑制小鼠心室肌細(xì)胞的鈣瞬變和收縮,并且在我們的課題組中進(jìn)行了廣泛的研究。但是,抑制作用的詳細(xì)機(jī)制尚未完全了解。例如,尚不清楚表面受體是否參與FABP3介導(dǎo)的肌力作用。G蛋白偶聯(lián)的多巴胺受體主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,也存在于心臟中。但是,人們對(duì)心臟中多巴胺受體的生理作用知之甚少。最近,據(jù)報(bào)道FABP3結(jié)合并調(diào)節(jié)小鼠腦中2型多巴胺受體。當(dāng)前的研究中,我們決定探索心臟中不同多巴胺受體的表達(dá)及其生理作用。該課題旨在揭示心臟及心肌細(xì)胞中多巴胺受體的亞型,亞細(xì)胞分布模式以及可能的生理作用。方法:1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本實(shí)驗(yàn)選擇的動(dòng)物飼養(yǎng)于實(shí)時(shí)監(jiān)測大氣壓力、濕度、室溫范圍為23-25℃的SPF級(jí)環(huán)境中,均為自由進(jìn)食進(jìn)水且周齡是12-14的C57BL/6健康雄性小鼠。2.通過q RT-PCR技術(shù)來檢測心房肌細(xì)胞和心室肌細(xì)胞中DRD1及DRD2基因的m RNA水平表達(dá)。3.使用蛋白印跡法檢測心肌組織中的Drd1和Drd2在蛋白水平的表達(dá)。4.使用生物標(biāo)記素的方法對(duì)心肌細(xì)胞中的DRD1和DRD2進(jìn)行定位。5.免疫熒光方法觀察DRD1以及DRD2在心肌細(xì)胞中的分布。6.通過q RT-P...

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
英文縮寫
前言
材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.4 PCR引物
    2 方法
        2.1 試劑配制
        2.2 急性分離小鼠左室心肌細(xì)胞
        2.3 免疫熒光技術(shù)
            2.3.1 做免疫熒光前的細(xì)胞處理步驟
            2.3.2 洗細(xì)胞
            2.3.3 山羊血清封閉
            2.3.4 孵育一抗
            2.3.5 洗細(xì)胞
            2.3.6 孵育二抗
            2.3.7 避光洗細(xì)胞
            2.3.8 使用DAPI染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色
            2.3.9 指甲油封片
            2.3.10 共聚焦顯微鏡下拍照
        2.4 Quantitative Real time PCR檢測小鼠心肌細(xì)胞中DRD1-DRD5的m RNA表達(dá)
            2.4.1 做PCR前組織的處理
            2.4.2 總RNA的提取
            2.4.3 測量總RNA濃度
            2.4.4 反轉(zhuǎn)錄
            2.4.5 反應(yīng)體系
            2.4.6 Real-time PCR循環(huán)參數(shù)的設(shè)置及條件的確定
        2.5 Western實(shí)驗(yàn)
            2.5.1 繪制蛋白濃度測量標(biāo)準(zhǔn)曲線
            2.5.2 樣本蛋白處理
            2.5.3 配膠
            2.5.4 電泳
            2.5.5 轉(zhuǎn)膜
            2.5.6 封閉
            2.5.7 洗膜
            2.5.8 與一抗結(jié)合
            2.5.9 洗膜
            2.5.10 與二抗結(jié)合
            2.5.11 洗膜
            2.5.12 顯影
        2.6 生物素標(biāo)記法
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理及相關(guān)分析
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 GPCR信號(hào)與心功能
    1 G蛋白偶聯(lián)受體與心功能
    2 腎上腺素能受體信號(hào)與心肌收縮
    3 其他的GPCRs與心肌收縮性
    4 G蛋白、相關(guān)信號(hào)介質(zhì)與心肌收縮力
    5 通過心臟G蛋白偶聯(lián)受體調(diào)節(jié)心肌收縮力的藥物
    6 結(jié)論/未來
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號(hào)：3858169