發(fā)布時間：2023-08-26 02:38

　　高等植物種子積累大量的儲藏蛋白質(zhì),為種子萌發(fā)提供氮源。在種子成熟過程中,種子儲藏蛋白質(zhì)(SSP)以前體形式在粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(rER)大量合成,通過囊泡運輸轉(zhuǎn)運到蛋白質(zhì)儲藏型液泡(PSV)中,在PSV中被加工成成熟形式儲存起來。我們前期研究發(fā)現(xiàn),擬南芥MAG2復(fù)合體定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上,在高爾基體到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)逆向運輸過程中運輸囊泡在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的拴留步驟發(fā)揮重要功能。MAG2復(fù)合體包含四個亞基,MAG2、MIP1、MIP2和MIP3。這些亞基的缺失突變體種子細胞的囊泡運輸受阻,導(dǎo)致ER腔內(nèi)積累大量的SSP前體,并引起ER stress。種子發(fā)育過程中,ABA信號通路和其他轉(zhuǎn)錄因子起關(guān)鍵調(diào)控作用。本研究以MAG2復(fù)合體亞基缺失突變體mip2-1、mag2-1、mip3-1單突變體和mag2-lmip3-1、mip2-1mip3-1雙突變體以及ABA信號通路缺陷突變體abi5-7、pyl112458、snrk2.2/23/2.6、aba2-1為實驗材料,初步探討了種子成熟、休眠和萌發(fā)過程中ER-Golgi間囊泡運輸與ABA信號通路之間的相關(guān)性。首先,通過對MAG2復(fù)合體亞基缺失單、雙突變體生長發(fā)育過程的表型...

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 囊泡運輸途徑
        1.1.1 種子儲藏蛋白質(zhì)的運輸途徑
    1.2 ABA代謝途徑
        1.2.1 ABA信號通路
    1.3 種子成熟和儲藏物質(zhì)調(diào)控機制
        1.3.1 種子成熟的調(diào)控
        1.3.2 儲藏物質(zhì)的調(diào)控
    1.4 種子休眠的調(diào)控
    1.5 種子萌發(fā)的調(diào)控
    1.6 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 抗體
    2.2 實驗儀器
    2.3 實驗試劑
    2.4 擬南芥植株雜交
    2.5 純合雙突變體突變體篩選
        2.5.1 葉片基因組DNA的提取
        2.5.2 PCR擴增檢測
        2.5.3 凝膠電泳
    2.6 表型觀察
        2.6.1 突變體初期生長情況觀察
        2.6.2 突變體生長發(fā)育情況
        2.6.3 突變體種子表型
    2.7 突變體萌發(fā)率統(tǒng)計
        2.7.1 不同儲存時間突變體種子的萌發(fā)率
        2.7.2 ABA和NaCl處理下突變體種子的萌發(fā)率
    2.8 Western Blot
        2.8.1 Western Blot實驗步驟
        2.8.2 考馬斯亮藍染色、脫色
    2.9 RT-PCR
3 結(jié)果與分析
    3.1 MAG2拴留復(fù)合體雙突變體制備與篩選
    3.2 MAG2拴留復(fù)合體亞基基因缺失對擬南芥的影響
        3.2.1 對擬南芥植物生長發(fā)育的影響
        3.2.2 對擬南芥種子發(fā)育的影響
        3.2.3 對擬南芥蛋白質(zhì)運輸?shù)挠绊?br>        3.2.4 囊泡運輸缺陷引起ER stress
        3.2.5 對擬南芥種子壽命的影響
        3.2.6 對植物對外界環(huán)境脅迫應(yīng)答的影響
    3.3 MAG2復(fù)合體亞基缺失對種子成熟、休眠和萌發(fā)調(diào)控因子表達的影響
        3.3.1 對ABI3、ABI4和ABI5表達水平的影響
        3.3.2 對轉(zhuǎn)錄因子LEC1、LEC2和FUS3表達水平的影響
        3.3.3 對轉(zhuǎn)錄因子WRKY40、WRKY41、WRKY6的影響
    3.4 MAG2復(fù)合體與ABA信號途徑的相關(guān)性
        3.4.1 ABA信號通路對MAG2復(fù)合體穩(wěn)定性的影響
        3.4.2 ABA信號通路對蛋白質(zhì)運輸?shù)挠绊?br>        3.4.3 ABA信號通路對種子壽命的影響
        3.4.4 MAG2復(fù)合體與ABA信號途徑的相關(guān)性
討論
結(jié)論
參考文獻
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝
附件



本文編號：3843788