[目的]對CD36基因進行體外克隆表達,建立CD36基因cDNA在大腸桿菌中表達的實驗技術(shù)以及進行CD36蛋白三級結(jié)構(gòu)的預(yù)測并利用生物信息學(xué)方法進行分析。[方法]以人血液RNA為模板,RT-PCR擴增CD36的基因序列;并構(gòu)建原核表達質(zhì)粒pET-32a-CD36轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DE3中后,經(jīng)過IPTG誘導(dǎo)表達后進行SDS-PAGE驗證。[結(jié)果]成功克隆了人CD36基因并構(gòu)建出原核表達質(zhì)粒,成功轉(zhuǎn)入表達菌大腸桿菌DE3中后經(jīng)IPTG誘導(dǎo)成功表達,且在1 mmol/L的誘導(dǎo)劑濃度下培養(yǎng)6 h表達量最佳。利用Phyre2和Abcpred軟件預(yù)測蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和B細胞抗原表位,B細胞抗原表位評分大于0.85的CD36的B細胞抗原表位有8個。[結(jié)論]成功建立了人CD36基因的原核表達的實驗技術(shù),并對CD36的結(jié)構(gòu)及B細胞抗原表位進行了預(yù)測,為后續(xù)研究CD36基因的功能和抗體制備提供方向和奠定基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗材料
        1.1.2 試劑
        1.1.3 儀器
        1.1.4 培養(yǎng)基
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計
        1.2.2 RNA、cDNA的獲取
        1.2.3 CD36原核表達載體的構(gòu)建與鑒定
        1.2.4 重組質(zhì)粒雙酶切鑒定及測序
        1.2.5 目的蛋白的誘導(dǎo)表達
        1.2.6 CD36結(jié)構(gòu)及B細胞抗原表位的預(yù)測
2 結(jié)果與分析
    2.1 CD36基因的克隆
    2.2 雙酶切的驗證
    2.3 CD36基因表達條件的優(yōu)化
    2.4 CD36蛋白的結(jié)構(gòu)預(yù)測
    2.5 CD36的B細胞抗原表位的預(yù)測及分析
3 討論
4 結(jié)論



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