目的:在乳酸乳球菌中重組表達(dá)乙醛脫氫酶(ALDH)。方法:合成畢赤酵母ALDH基因,PCR擴(kuò)增后通過重組構(gòu)建pNZ8048-ALDH表達(dá)載體,電轉(zhuǎn)至乳酸乳球菌NZ9000感受態(tài),Nisin誘導(dǎo)表達(dá)后經(jīng)Ni柱親和層析純化ALDH蛋白,比色法測(cè)定酶活。結(jié)果:構(gòu)建了pNZ8048-ALDH表達(dá)載體,在乳酸乳球菌NZ9000中實(shí)現(xiàn)了ALDH的重組表達(dá),目的蛋白占全菌蛋白的17.2%,其中可溶性表達(dá)比例為53%,重組菌株ALDH活力為0.638 U/mL,親和層析純化蛋白純度約70%,比活為0.48 U/mg。結(jié)論:在乳酸乳球菌中表達(dá)并純化獲得了有活性的ALDH。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 ALDH表達(dá)載體構(gòu)建
    1.3 ALDH的誘導(dǎo)表達(dá)
    1.4 ALDH活性檢測(cè)
    1.5 ALDH的純化
2 結(jié)果
    2.1 pNZ8048-ALDH表達(dá)載體構(gòu)建
    2.2 ALDH的誘導(dǎo)表達(dá)
    2.3 ALDH的純化
3 討論



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