DNA錯(cuò)配修復(fù)(DNA mismatch repair,MMR)蛋白Mlh1和其它因子形成多種不同的復(fù)合物,在DNA復(fù)制后的MMR途徑和減數(shù)分裂DNA重組中發(fā)揮重要作用。然而對(duì)Mlh1的功能并不完全清楚,進(jìn)一步分析Mlh1在不同進(jìn)化地位生物中的功能具有重要意義。嗜熱四膜蟲(Tetrahymena thermophila)含有不同的錯(cuò)配修復(fù)復(fù)合物,基因表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn),MutL復(fù)合物中的TMLH1(TTHERM₀0127000)在營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期和饑餓期低水平表達(dá),在有性生殖減數(shù)分裂期表達(dá)水平顯著上調(diào)。免疫熒光定位顯示營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)期,Tmlh1定位于生殖系小核和轉(zhuǎn)錄活躍的大核;有性生殖期,定位于功能性小核和親本大核,但在凋亡的大核和小核中消失。在減數(shù)分裂和有絲分裂時(shí)期,Tmlh1和α-微管蛋白(α-tubulin)存在共定位;而有性生殖后期,Tmlh1與異染色質(zhì)蛋白Pdd1共定位于DNA刪除的異染色結(jié)構(gòu)域。TMLH1敲除細(xì)胞增殖速率降低,DNA損傷修復(fù)抑制,導(dǎo)致有性生殖細(xì)胞配對(duì)率降低和微核形成。1 mmol/L甲基甲磺酸甲酯(methy methanesulfonate, MM...

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 嗜熱四膜蟲細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 TMLH1表達(dá)譜和聚類分析
    1.4 pNeo4-TMLH1和pXS75-2HA-TMLH1重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 細(xì)胞的轉(zhuǎn)化和篩選
    1.6 間接免疫熒光定位
    1.7 免疫共沉淀和質(zhì)譜分析
    1.8 Western 印跡檢測(cè)
    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 TMLH1基因的分析
    2.2 Tmlh1定位于轉(zhuǎn)錄活躍的大核和功能性小核
    2.3 Tmlh1與α-微管蛋白在紡錘體結(jié)構(gòu)的共定位T
    2.4 Tmlh1與Pdd1共定位于發(fā)育中的新大核
    2.5 敲除TMLH1影響四膜蟲細(xì)胞增殖和有性生殖進(jìn)程
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