黑酵母(Black Yeast)是一類在細胞壁內(nèi)外產(chǎn)黑色素的酵母狀真菌,是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最耐鹽真核生物之一。黑酵母具有典型的細胞多形性,產(chǎn)黑色素、胞外多糖等特征,但這些因素是否與其高耐鹽的特性相關,目前還不清楚,同時具有上述特性的一種黑酵母出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)為研究這個科學問題提供了重要模型。本試驗以一株分離于草莓果實的黑酵母:出芽短梗霉NG作為材料,檢測在不同鹽脅迫條件下的菌體生長狀況、細胞分化表型、抗?jié)B透應激積累物質(zhì)等特征,并通過轉(zhuǎn)錄組學探究其耐鹽性的分子生物學機制,結論如下:(1)出芽短梗霉通過細胞分化響應NaCl脅迫。鹽脅迫條件下細胞分化為膨大細胞抵抗NaCl脅迫并通過多端出芽方式繁殖,在低鹽濃度(<9%NaCl)時,細胞可以分化為菌絲體逃離不利環(huán)境。在高鹽濃度時,細胞向耐鹽性更強的膨大細胞、有橫膈膜的膨大細胞和分生組織結構分化。(2)出芽短梗霉能通過積累甘油來抵抗高滲透脅迫,甘油積累量與NaCl濃度呈正相關。胞內(nèi)積累甘油量隨培養(yǎng)時間有波動性,波動程度跟NaCl濃度呈線性相關,細胞通過調(diào)節(jié)甘油積累消耗平衡細胞生長與鹽脅迫適應。出芽短...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 酵母鹽脅迫信號傳導途徑
        1.1.1 HOG-MAPK信號途徑
        1.1.2 CaN信號途徑
        1.1.3 PKA信號途徑
    1.2 酵母鹽脅迫的分子應答機制
        1.2.1 Na+平衡機制
        1.2.2 滲透平衡機制
    1.3 相容性溶質(zhì)
        1.3.1 糖類及糖苷類
        1.3.2 醇類
        1.3.3 甜菜堿類
        1.3.4 氨基酸類
    1.4 黑酵母耐鹽研究進展
        1.4.1 黑酵母
        1.4.2 黑酵母耐鹽研究進展
    1.5 出芽短梗霉的研究進展
        1.5.1 出芽短梗霉概述
        1.5.2 出芽短梗霉的生理代謝產(chǎn)物
        1.5.3 出芽短梗霉的細胞多形性
    1.6 出芽短梗霉耐鹽機制研究意義
    1.7 技術路線
第二章 鹽脅迫下出芽短梗霉NG的表型特性
    2.1 引言
    2.2 材料
        2.2.1 試驗所用菌種、試劑
        2.2.2 培養(yǎng)基配方
        2.2.3 主要儀器與廠家
    2.3 方法
        2.3.1 菌種活化和種子培養(yǎng)
        2.3.2 鹽脅迫下菌體生長情況
        2.3.3 鹽脅迫下菌落形態(tài)特征
        2.3.4 鹽脅迫下細胞形態(tài)特征
        2.3.5 鹽脅迫下細胞微觀形態(tài)特征
    2.4 結果與分析
        2.4.1 不同鹽濃度下出芽短梗霉NG生長情況分析
        2.4.2 不同鹽濃度下出芽短梗霉NG菌落生長特征
        2.4.3 不同鹽濃度下出芽短梗霉NG細胞形態(tài)特征
        2.4.4 不同鹽濃度下出芽短梗霉NG細胞超微形態(tài)
    2.5 小結
第三章 出芽短梗霉NG抗?jié)B透應激機制
    3.1 引言
    3.2 材料
        3.2.1 試驗所用菌種、試劑
        3.2.2 培養(yǎng)基和滅菌條件
        3.2.3 主要儀器與廠家
    3.3 方法
        3.3.1 菌體培養(yǎng)與收集
        3.3.2 菌體干重測定
        3.3.3 甘油HPLC檢測方法
        3.3.4 海藻糖HPLC檢測方法
        3.3.5 統(tǒng)計學處理
    3.4 結果與分析
        3.4.1 菌體生物量
        3.4.2 甘油標準曲線
        3.4.3 胞內(nèi)甘油含量分析
        3.4.4 胞內(nèi)甘油動態(tài)變化含量
        3.4.5 胞內(nèi)海藻糖HPLC檢測分析
    3.5 小結
第四章 鹽脅迫條件下出芽短梗霉NG的轉(zhuǎn)錄組測序與分析
    4.1 引言
    4.2 材料
        4.2.1 試驗所用菌種、試劑
        4.2.2 培養(yǎng)基和滅菌條件
        4.2.3 主要儀器與廠家
    4.3 方法
        4.3.1 菌種活化和種子培養(yǎng)
        4.3.2 菌體的培養(yǎng)與收集
        4.3.3 總RNA提取和核酸質(zhì)量檢測
        4.3.4 轉(zhuǎn)錄組測序文庫構建
        4.3.5 轉(zhuǎn)錄本組裝
        4.3.6 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析流程
    4.4 結果與分析
        4.4.1 轉(zhuǎn)錄組測序
        4.4.2 轉(zhuǎn)錄本組裝
        4.4.3 基因功能注釋
        4.4.4 差異基因分析
        4.4.5 耐Na Cl脅迫相關差異基因分析
        4.4.6 甘油合成相關差異表達基因
    4.5 小結
第五章 結論與展望
    5.1 結論
    5.2 展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表文章



本文編號：3820969