細(xì)胞是相對(duì)獨(dú)立的生命基本單位,同一類型的細(xì)胞代謝途徑基本相同。一般而言,研究細(xì)胞生長的基本規(guī)律,主要途徑為觀察整個(gè)細(xì)胞群的生長狀態(tài)。由于微環(huán)境的差異,往往存在“細(xì)胞異質(zhì)性”現(xiàn)象。對(duì)于單細(xì)胞分析技術(shù)而言,它的優(yōu)勢(shì)在于能對(duì)細(xì)胞的生理狀態(tài)獲得更加全面的信息。以電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(ICP-MS)為主要手段的單細(xì)胞分析方法在單個(gè)細(xì)胞的元素檢測(cè)上提供了解決途徑,事實(shí)上,ICP-MS單細(xì)胞分析已在藥物的檢測(cè)、毒理檢測(cè)等方面體現(xiàn)了它的能力。本文利用ICP-MS分析了單個(gè)C.testosteroni S44細(xì)胞中的硒元素含量與分布狀態(tài)。其中菌株S44細(xì)胞可以還原亞硒酸鈉(Se(Ⅳ)),并在胞內(nèi)生成硒納米粒子(BioSeNPs),通過添加亞硒酸鈉對(duì)菌株S44的培養(yǎng)與優(yōu)化,利用得到的含納米粒子的細(xì)胞進(jìn)行了ICP-MS的單細(xì)胞分析實(shí)驗(yàn)。主要研究內(nèi)容與結(jié)果如下:(1)胞內(nèi)硒納米顆粒的生物制備。通過對(duì)菌株S44培養(yǎng)條件的探索,我們發(fā)現(xiàn)其在28℃、搖床轉(zhuǎn)速150r/min、接種比例為1%、培養(yǎng)液體積為100mL、Se(Ⅳ)濃度為0.2mmol/L的條件下得到了球形的硒納米顆粒,尺寸分布在50-300nm,Se(...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
第一章 緒論
    1.1 單細(xì)胞分析的意義
    1.2 基于ICP-MS的單細(xì)胞元素分析
    1.3 ICP-MS元素分析的研究熱點(diǎn)
        1.3.1 時(shí)間分辨ICP-MS單細(xì)胞分析原理的探索
        1.3.2 ICP-MS單細(xì)胞分析中進(jìn)樣技術(shù)的革新
        1.3.3 元素標(biāo)記策略下的ICP-MS定量分析
        1.3.4 基于ICP-MS聯(lián)用技術(shù)的應(yīng)用
    1.4 微生物還原亞硒酸鈉合成硒納米的研究
        1.4.1 硒與人體健康密切相關(guān)
        1.4.2 SeNPs的制備方法
        1.4.3 代謝硒化合物的微生物資源
        1.4.4 微生物對(duì)硒的轉(zhuǎn)化機(jī)制簡介
    1.5 課題研究意義與內(nèi)容
        1.5.1 課題的研究意義簡述
        1.5.2 課題的主要研究內(nèi)容
第二章 硒納米顆粒的生物制備
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        2.2.2 儀器及試劑
        2.2.3 培養(yǎng)基的選擇
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 菌株S44還原Se(Ⅳ)合成BioSeNPs
            2.3.1.1 菌株S44的活化培養(yǎng)
            2.3.1.2 Se(Ⅳ)轉(zhuǎn)化為BioSeNPs轉(zhuǎn)化率的測(cè)定
            2.3.1.3 生物硒納米顆粒BioSeNPs的提取
        2.3.2 菌株S44生長曲線的繪制
        2.3.3 菌株S44還原Se(Ⅳ)的單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.3.3.1 溶液初始pH對(duì)菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
            2.3.3.2 搖床溫度對(duì)菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
            2.3.3.3 菌株S44接種比對(duì)還原Se(Ⅳ)的影響
            2.3.3.4 搖床轉(zhuǎn)速對(duì)菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
            2.3.3.5 錐形瓶裝液量對(duì)菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
            2.3.3.6 Se(Ⅳ)濃度對(duì)菌株S44還原亞硒酸鈉的影響
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.4.1 菌株S44還原Se(Ⅳ)溶液顏色的變化
        2.4.2 菌株S44的生長曲線
        2.4.3 不同初始pH對(duì)菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
        2.4.4 不同溫度對(duì)菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
        2.4.5 不同接種比例對(duì)菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
        2.4.6 不同搖床轉(zhuǎn)速對(duì)菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
        2.4.7 不同裝液量對(duì)菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
        2.4.8 Se(Ⅳ)濃度對(duì)菌株S44還原Se(Ⅳ)的影響
        2.4.9 掃描電鏡觀察
        2.4.10 透射電鏡觀察
        2.4.11 EDX能譜分析
        2.4.12 紫外光譜分析
        2.4.13 紅外光譜分析
        2.4.14 還原產(chǎn)物BioSeNPs的 Zeta電位分析
    2.5 本章小結(jié)
第三章 硒納米顆粒的優(yōu)化制備探索
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.2 添加劑的溶液制備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 BSA溶液與LB培養(yǎng)基體積比對(duì)Se(Ⅳ)還原的影響
        3.3.2 CTS溶液與LB培養(yǎng)基體積比對(duì)Se(Ⅳ)還原的影響
        3.3.3 PVP溶液與LB培養(yǎng)基體積比對(duì)Se(Ⅳ)還原的影響
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.4.1 外源添加物對(duì)菌株S44還原Se(Ⅳ)溶液顏色的變化
        3.4.2 BSA溶液與LB培養(yǎng)基體積比對(duì)Se(Ⅳ)還原的影響
        3.4.3 CTS溶液與LB培養(yǎng)基體積比對(duì)Se(Ⅳ)還原的影響
        3.4.4 PVP溶液與LB培養(yǎng)基體積比對(duì)Se(Ⅳ)還原的影響
        3.4.5 不同添加劑下Se(Ⅳ)轉(zhuǎn)化率隨時(shí)間的變化曲線
        3.4.6 不同添加劑培養(yǎng)下產(chǎn)物的透射電鏡觀察
        3.4.7 不同添加劑培養(yǎng)下產(chǎn)物的紅外光譜分析
        3.4.8 不同添加劑培養(yǎng)下產(chǎn)物的Zeta電位分析
    3.5 本章小結(jié)
第四章 硒納米的ICP-MS檢測(cè)分析
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        4.2.2 儀器及試劑
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
            4.2.3.1 菌株S44胞內(nèi)具有BioSeNPs材料的培養(yǎng)
            4.2.3.2 菌株S44胞內(nèi)具有BioSeNPs材料的分散
            4.2.3.3 ICP-MS分析菌株S44胞內(nèi)BioSeNPs
            4.2.3.4 ICP-MS單細(xì)胞數(shù)據(jù)分析方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.3.1 單細(xì)胞事件的分辨
        4.3.2 不同樣品引入ICP-MS效率的比較
        4.3.3 合適菌株S44細(xì)胞的選取
        4.3.4 菌株S44表面EPS的去除
        4.3.5 菌株S44進(jìn)樣密度的選擇
        4.3.6 ICP-MS重要參數(shù)Dwell Time(分辨時(shí)間)的探究
            4.3.6.1 Dwell Time對(duì)ICP-MS信號(hào)峰型的影響
            4.3.6.2 Dwell Time對(duì)ICP-MS信號(hào)強(qiáng)度的影響
            4.3.6.3 Dwell Time對(duì)ICP-MS信號(hào)數(shù)量的影響
        4.3.7 胞內(nèi)硒納米顆粒的ICP-MS定性檢測(cè)分析
            4.3.7.1 不同濃度Se(Ⅳ)培養(yǎng)下ICP-MS單細(xì)胞事件數(shù)的變化
            4.3.7.2 ICP-MS應(yīng)用于胞內(nèi)硒納米顆粒的定性檢測(cè)分析
            4.3.7.3 菌株S44不同培養(yǎng)時(shí)間下的ICP-MS實(shí)時(shí)檢測(cè)
    4.4 本章小結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 全文總結(jié)
    5.2 研究展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3819839