發(fā)布時(shí)間：2023-05-03 14:58

　　抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)是一類具有抗病毒、抗真菌、抗細(xì)菌及抑制癌細(xì)胞生長等生物學(xué)功能的小肽,是一類重要的抗生素潛在替代品,其在生物醫(yī)藥、食品防腐及畜牧業(yè)綠色養(yǎng)殖等領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用。本課題以南海海洋沉積物為研究出發(fā)材料,構(gòu)建了宏基因組文庫;利用基于抗菌肽功能的篩選方法挖掘了具有產(chǎn)業(yè)應(yīng)用價(jià)值的新型抗菌肽;之后應(yīng)用氨基酸測(cè)序技術(shù)測(cè)析了其一級(jí)結(jié)構(gòu);隨后利用基因工程技術(shù)和枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)優(yōu)化出了新型抗菌肽的胞外表達(dá)體系。本文的主要結(jié)論是:1.應(yīng)用宏基因組技術(shù)從南海海洋沉淀物中提取、純化并獲得了的宏基因組文庫DNA。2.在南海海洋沉積物宏基因組文庫DNA基礎(chǔ)上,構(gòu)建出了基于枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)的宏基因組文庫。3.應(yīng)用抗菌肽功能平板篩選從南海海洋沉淀物宏基因組文庫中篩選出了產(chǎn)生抑菌圈的陽性克隆子,之后應(yīng)用DNA測(cè)序技術(shù)獲取新抗菌肽的堿基序列。4.對(duì)篩選得到抗菌肽進(jìn)行了溫度、酸堿度和酶的耐受性以及抑菌譜、抑菌效價(jià)等方面的生物學(xué)特性研究,獲得了一個(gè)特殊生物學(xué)特性的抗菌肽,命名為Naseain 9。5.應(yīng)用自動(dòng)Edman降解測(cè)序技術(shù)測(cè)定出了 Naseain 9的...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
上篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 抗菌肽的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展
        1.1 抗菌肽的發(fā)現(xiàn)
        1.2 抗菌肽的來源及種類
            1.2.1 具有螺旋結(jié)構(gòu)的線性抗菌肽
            1.2.2 富含特定氨基酸的線性抗菌肽
            1.2.3 具有一個(gè)二硫鍵的抗菌肽
            1.2.4 具有兩個(gè)或多個(gè)二硫鍵的抗菌肽
            1.2.5 含羊毛硫及其它結(jié)構(gòu)的抗菌肽
        1.3 抗菌肽的作用特點(diǎn)
        1.4 抗菌肽的作用機(jī)制
        1.5 抗菌肽在不同領(lǐng)域的應(yīng)用前景及其存在的問題
            1.5.1 抗菌肽在生物醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用
            1.5.2 抗菌肽在食品防腐領(lǐng)域的應(yīng)用
            1.5.3 抗菌肽在農(nóng)業(yè)病害防控領(lǐng)域的應(yīng)用
            1.5.4 抗菌肽在應(yīng)用中所存在的問題
        1.6 海洋抗菌肽資源的優(yōu)勢(shì)
        1.7 海洋抗菌物質(zhì)資源挖掘的研究進(jìn)展
    第二章 枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)
        2.1 枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)及研究進(jìn)展
        2.2 基因在枯草芽孢桿菌中表達(dá)所需的組件
            2.2.1 多δ因子
            2.2.2 啟動(dòng)子
            2.2.3 終止子
        2.3 蛋白質(zhì)在枯草芽孢桿菌中的分泌
        2.4 枯草芽孢桿菌提高基因表達(dá)量的影響因素
            2.4.1 密碼子的選取
            2.4.2 目的基因的拷貝數(shù)
            2.4.3 載體的選用
            2.4.4 枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)條件
            2.4.5 啟動(dòng)子的強(qiáng)弱
            2.4.6 翻譯起始的效率
        2.5 枯草芽孢桿菌表達(dá)體系中所存在的問題及發(fā)展方向
        2.6 枯草芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)
        2.7 本研究的目的和意義
        2.8 本研究的技術(shù)路線
下篇 試驗(yàn)研究
    第三章 深海沉積物宏基因組文庫構(gòu)建
        3.1 引言
        3.2 材料與方法
            3.2.1 材料與樣品
            3.2.2 沉積物基因組總DNA的提取
            3.2.3 沉積物基因組總DNA的純化
            3.2.4 基于枯草芽孢桿菌的宏基因組文庫的構(gòu)建
            3.2.5 重組克隆子的鑒定
            3.2.6 克隆子保存
        3.3 結(jié)果
            3.3.1 沉積物基因組總DNA的提取
            3.3.2 文庫質(zhì)量鑒定及評(píng)價(jià)
            3.3.3 抗菌肽克隆篩選
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 所獲抗菌肽結(jié)構(gòu)分析及生物學(xué)特性研究
        4.1 引言
        4.2 材料和方法
            4.2.1 抗菌肽抑菌活性分析
            4.2.2 抗菌肽對(duì)HT-29細(xì)胞的裂解活性
            4.2.3 抗菌肽穩(wěn)定性測(cè)定
            4.2.4 抗菌肽一級(jí)和二級(jí)結(jié)構(gòu)分析
            4.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 抗菌肽對(duì)多種細(xì)菌的抑菌活性和細(xì)胞毒性
            4.3.2 抗菌肽在不同條件下的穩(wěn)定性測(cè)定
            4.3.3 抗菌肽結(jié)構(gòu)分析
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第五章 新型抗菌肽Naseain 9的高效表達(dá)
        5.1 引言
        5.2 材料和方法
            5.2.1 重組枯草芽孢桿菌BNAS菌株的構(gòu)建
            5.2.2 重組枯草芽孢桿菌BNAS的搖瓶發(fā)酵
            5.2.3 總RNA的分離和實(shí)時(shí)定量PCR
        5.3 結(jié)果
            5.3.1 重組枯草芽孢桿菌BNAS菌株的構(gòu)建
            5.3.2 重組枯草芽孢桿菌BNAS菌株的搖瓶水平發(fā)酵
            5.3.3 抗菌肽Naseain 9的表達(dá)合成
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄一 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化枯草芽孢桿菌WB600感受態(tài)細(xì)胞的方法
附錄二 比濁法測(cè)定抗菌肽抑菌率方法
附錄三 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α方法
致謝
博士生期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文,專著
博士后期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文,專著
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本文編號(hào)：3806926