背景利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的治療性重組蛋白已經(jīng)成為生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)重要組成部分。哺乳動物表達系統(tǒng)是生產(chǎn)治療性重組蛋白的主要平臺,在哺乳動物表達系統(tǒng)中應用最為廣泛的是中國倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovary,CHO)表達系統(tǒng)。但是CHO細胞表達系統(tǒng)存在轉(zhuǎn)基因沉默或表達水平不穩(wěn)定等問題。研究發(fā)現(xiàn)核基質(zhì)附著區(qū)(matrix attachment regions,MAR)作為一種表觀遺傳調(diào)控元件,不僅能夠克服轉(zhuǎn)基因沉默而且能提高轉(zhuǎn)基因表達水平。但目前報道的用于提高轉(zhuǎn)基因表達的MAR序列有限,并且其調(diào)控轉(zhuǎn)基因表達的作用機制和分子特征尚不清楚。目的篩選出能有效提高轉(zhuǎn)基因表達的新型MAR序列,用于CHO細胞中提高轉(zhuǎn)基因表達水平并分析其作用機制及分子特征。方法1.載體構(gòu)建和細胞轉(zhuǎn)染:人工合成human CSP-B MAR(本文稱為hu-MAR)、MAR-6(本文稱為MAR1)和DHFR intron MAR(本文稱為MAR2)序列,將不同MAR序列分別克隆至含綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescence protein,eGFP)表達載體的poly A下游。將構(gòu)建...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一節(jié) 新型MARs在 CHO細胞中對報告基因e GFP表達的影響及機制研究
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
第二節(jié) 新型MARs在 CHO細胞中對重組蛋白貝伐單抗表達的影響
    1 材料
    2 方法
    3 結(jié)果
    4 小結(jié)
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述:哺乳動物表達系統(tǒng)高效表達載體構(gòu)建策略
    參考文獻
附錄
攻讀學位期間發(fā)表文章情況
致謝
個人簡歷



本文編號：3789071