目的研究外源基因拷貝數(shù)、生產(chǎn)工藝、細(xì)胞多樣性對(duì)宿主細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響。方法構(gòu)建空載體CHO K1細(xì)胞株,檢測其外源基因拷貝數(shù),根據(jù)拷貝數(shù)的低、中、高對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類。使用不同的生產(chǎn)工藝測試低拷貝、中等拷貝和高拷貝的細(xì)胞群,觀察其宿主細(xì)胞蛋白表達(dá)之間的差異。最后將三個(gè)拷貝數(shù)水平的細(xì)胞群進(jìn)行混合,再生產(chǎn),觀察其混合表達(dá)的宿主細(xì)胞蛋白與單獨(dú)生產(chǎn)時(shí)表達(dá)宿主細(xì)胞蛋白的差異。結(jié)果研究結(jié)果顯示,不同拷貝數(shù)背景的細(xì)胞群之間表達(dá)宿主細(xì)胞蛋白相差6%～13%。相同的細(xì)胞進(jìn)行不同的工藝生產(chǎn)時(shí),也因?yàn)榛A(chǔ)培養(yǎng)基和補(bǔ)料的不同而使宿主細(xì)胞蛋白的種類不同。細(xì)胞多樣性增加并不能引起宿主細(xì)胞蛋白表達(dá)的種類增多。結(jié)論宿主細(xì)胞蛋白的表達(dá)與外源基因拷貝數(shù)、生產(chǎn)工藝以及細(xì)胞群的多樣性有關(guān)。

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
        1.1.1 材料來源
        1.1.2 試劑和儀器
    1.2 方法
        1.2.1 表達(dá)外源基因的CHO K1空載體細(xì)胞株的建立
        1.2.2 外源基因相對(duì)拷貝數(shù)的檢測
        1.2.3 不同生產(chǎn)工藝針對(duì)不同拷貝數(shù)背景的細(xì)胞群進(jìn)行宿主細(xì)胞蛋白的生產(chǎn)
        1.2.4 不同多樣性細(xì)胞群進(jìn)行宿主細(xì)胞蛋白的生產(chǎn)
        1.2.5 宿主細(xì)胞蛋白種類的分析與對(duì)比
2 結(jié)果
    2.1 表達(dá)空載體CHO K1細(xì)胞群的篩選
    2.2 不同拷貝數(shù)背景的細(xì)胞群建立
    2.3 不同生產(chǎn)工藝的批次補(bǔ)料實(shí)驗(yàn)
    2.4 細(xì)胞多樣性
3 討論



本文編號(hào)：3771985