脂肪酶廣泛應(yīng)用于食品加工、生物柴油制備等領(lǐng)域。為了有效提高微生物脂肪酶的可利用度,將來源于解酯嗜熱菌(Thermosyntropha lipolytica DSM 11003)的脂肪酶基因(tll2)克隆到大腸桿菌表達載體pET28a中,獲得重組質(zhì)粒pET28a-TLL2,將pET28a-TLL2轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)宿主菌中進行高效表達。通過熱處理和鎳柱親和層析得到電泳純的蛋白TlLip2,對其進行酶學(xué)性質(zhì)表征。結(jié)果顯示,TlLip2的亞基分子質(zhì)量為57 ku,比酶活為31 U/mg,最適反應(yīng)pH及溫度分別為8.0和60℃。在60℃以下、pH 6.0～11.0范圍內(nèi),TlLip2的穩(wěn)定性較好,相對酶活均維持在60%以上。金屬離子K⁺和Na⁺對TlLip2有較大激活作用,而Co²⁺、Zn²⁺、SDS和Tween 80對TlLip2酶活力抑制作用明顯。TlLip2在極性小的有機溶劑中具有較好的耐受性。TlLip2對中等碳鏈長度的對硝基苯酯顯示出更高的活性,其中以對硝基苯己酯為底物時,TlLip...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 供試材料
        1.1.1 菌株與質(zhì)粒
        1.1.2 試劑
        1.1.3 培養(yǎng)基
    1.2 試驗方法
        1.2.1 Tl Lip2的克隆
        1.2.2 Tl Lip2的誘導(dǎo)表達
        1.2.3 Tl Lip2的分離純化
        1.2.4 Tl Lip2的酶活力測定方法
        1.2.5 Tl Lip2的酶學(xué)性質(zhì)測定
        1.2.6 油酸乙酯的制備及檢測方法
2 結(jié)果與分析
    2.1 Tl Lip2的誘導(dǎo)表達及純化
    2.2 Tl Lip2的酶學(xué)性質(zhì)的測定
        2.2.1 最適溫度和溫度穩(wěn)定性
        2.2.2 最適pH和p H穩(wěn)定性
        2.2.3 金屬離子及化學(xué)試劑對酶活力的影響
        2.2.4 底物特異性
        2.2.5 有機溶劑耐受性
        2.2.6 動力學(xué)參數(shù)
    2.3 Tl Lip2催化制備油酸乙酯
        2.3.1 無溶劑體系中制備油酸乙酯
        2.3.2 異辛烷溶劑體系中制備油酸乙酯
3 結(jié)論



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