近年來,有助于促進(jìn)胃腸道健康、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的食源性功能因子逐漸成為食品營養(yǎng)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。乳桿菌作為一類GRAS級(jí)的腸道益生菌,其可通過競(jìng)爭(zhēng)腸道上皮細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)、干擾致病菌在腸道內(nèi)的定殖、產(chǎn)生細(xì)菌素、降低結(jié)腸pH以及對(duì)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生非特異性刺激對(duì)機(jī)體進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)。乳桿菌益生特性的發(fā)揮與其所攜帶的S-層蛋白（Surface-layer protein,簡(jiǎn)稱Slp）有關(guān),Slp具有多重益生特性,但其在免疫調(diào)節(jié)特性方面的研究仍不夠充分。因此,本研究旨在深入探究乳桿菌Slp的腸道免疫調(diào)節(jié)功能及相關(guān)作用機(jī)制,挖掘Slp對(duì)乳桿菌益生特性的生物學(xué)貢獻(xiàn),拓展和豐富人們對(duì)乳桿菌Slp特性的認(rèn)知。主要研究結(jié)果如下:以攜帶已知Slp的L.acidophilus NCFM為參照菌株,從收集到的15株乳桿菌中篩選出了6株攜帶Slp的乳桿菌。純化其氯化鋰提取物后,獲得6種電泳純且相對(duì)分子質(zhì)量為46,000的Slp。采用差示掃描量熱儀對(duì)這6種乳桿菌Slps的熱變性溫度檢測(cè)后得出:6種乳桿菌Slps的熱變性圖譜中均只出現(xiàn)一個(gè)吸熱峰,且它們的熱變性溫度在58-77°C之間。其中L.crispatus JCM 2009... 

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 乳桿菌S-層蛋白的概述
        1.1.1 乳桿菌S-層蛋白簡(jiǎn)介
        1.1.2 乳桿菌S-層蛋白的益生特性
    1.2 促炎癥因子激活的腸道炎癥反應(yīng)
        1.2.1 LPS及其激活的腸道炎癥反應(yīng)
        1.2.2 TNF-α及其激活的腸道炎癥反應(yīng)
    1.3 乳桿菌S-層蛋白免疫調(diào)節(jié)研究進(jìn)展
        1.3.1 對(duì)腸上皮細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)
        1.3.2 對(duì)巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)
    1.4 乳桿菌及其表面成分對(duì)腸道腫瘤細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)
        1.4.1 乳桿菌及其表面成分對(duì)腫瘤細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)的研究進(jìn)展
        1.4.2 乳桿菌及其表面成分對(duì)腫瘤細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)的作用機(jī)制
    1.5 論文立題背景及意義
    1.6 論文的主要研究內(nèi)容
第二章 攜帶S-層蛋白乳桿菌的篩選及其S-層蛋白的鑒定分析
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)菌株與試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 乳桿菌的活化及培養(yǎng)
        2.3.2 乳桿菌氯化鋰提取物的制備
        2.3.3 透射電子顯微鏡觀察乳桿菌表層結(jié)構(gòu)
        2.3.4 氯化鋰提取物中S-層蛋白的鑒定
        2.3.5 乳桿菌S-層蛋白的純化
        2.3.6 乳桿菌S-層蛋白熱變性溫度分析
        2.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 乳桿菌氯化鋰提取物的SDS-PAGE分析
        2.4.2 乳桿菌S-層結(jié)構(gòu)的顯微觀察
        2.4.3 S-層蛋白的分離純化
        2.4.4 S-層蛋白的熱力學(xué)特性
    2.5 本章小結(jié)
第三章 乳桿菌S-層蛋白對(duì)巨噬細(xì)胞的抗炎免疫調(diào)節(jié)作用及相關(guān)機(jī)制
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株與試劑
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 乳桿菌S-層蛋白的制備
        3.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.3.3 乳桿菌S-層蛋白的細(xì)胞毒性
        3.3.4 LPS誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞炎癥模型的建立
        3.3.5 RAW264.7細(xì)胞形態(tài)的觀察
        3.3.6 RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生ROS熒光強(qiáng)度及含量分析
        3.3.7 RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)TNF-α,IL-1β,PGE2和NO分泌水平的檢測(cè)
        3.3.8 細(xì)胞內(nèi)目的蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)
        3.3.9 細(xì)胞內(nèi)NF-κBp65核轉(zhuǎn)位觀察
        3.3.10 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 S-層蛋白對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞的毒性作用
        3.4.2 LPS最佳作用時(shí)間及最佳作用濃度的確定
        3.4.3 S-層蛋白對(duì)LPS刺激的RAW264.7 細(xì)胞活性及其形態(tài)的影響
        3.4.4 S-層蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)ROS生成的影響
        3.4.5 S-層蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)TNF-α和 IL-1β分泌水平的影響
        3.4.6 S-層蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)NO和 PGE2分泌水平的影響
        3.4.7 S-層蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)MAPK信號(hào)通路的影響
        3.4.8 S-層蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)NF-κB信號(hào)通路的影響
        3.4.9 S-層蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)NF-κB p65 核轉(zhuǎn)位的影響
    3.5 本章小結(jié)
第四章 乳桿菌S-層蛋白對(duì)腸上皮細(xì)胞屏障的免疫保護(hù)作用及相關(guān)機(jī)制
    4.1 前言
    4.2 材料與設(shè)備
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株與試劑
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 乳桿菌S-層蛋白的制備
        4.3.2 Caco-2細(xì)胞的培養(yǎng)及腸上皮屏障模型的建立
        4.3.3 S-層蛋白最佳濃度的確定
        4.3.4 腸上皮屏障損傷模型的建立
        4.3.5 腸上皮屏障細(xì)胞間跨膜電阻的測(cè)定
        4.3.6 腸上皮屏障細(xì)胞間通透性的測(cè)定
        4.3.7 IL-8的檢測(cè)
        4.3.8 細(xì)胞凋亡率檢測(cè)
        4.3.9 細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        4.3.10 細(xì)胞內(nèi)目標(biāo)蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)
        4.3.11 細(xì)胞內(nèi)NF-κBp65核轉(zhuǎn)位觀察
        4.3.12 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 S-層蛋白對(duì)Caco-2細(xì)胞的毒性作用
        4.4.2 S-層蛋白對(duì)腸上皮屏障細(xì)胞間跨膜電阻的影響
        4.4.3 S-層蛋白對(duì)腸上皮屏障細(xì)胞間通透性的影響
        4.4.4 TNF-α的最佳作用時(shí)間及濃度的確定
        4.4.5 S-層蛋白對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的腸上皮屏障細(xì)胞間跨膜電阻及通透性的影響
        4.4.6 S-層蛋白對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的腸上皮屏障細(xì)胞間緊密連接蛋白的影響
        4.4.7 S-層蛋白對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的腸上皮細(xì)胞內(nèi)IL-8 分泌水平的影響
        4.4.8 S-層蛋白對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的腸上皮細(xì)胞凋亡的影響
        4.4.9 S-層蛋白對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的腸上皮細(xì)胞內(nèi)NF-κB p65 核轉(zhuǎn)位的影響
    4.5 本章小結(jié)
第五章 乳桿菌S-層蛋白對(duì)腸道腫瘤細(xì)胞活性的影響及相關(guān)機(jī)制
    5.1 前言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株及試劑
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 乳桿菌S-層蛋白的制備
        5.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        5.3.3 相對(duì)細(xì)胞活性的評(píng)估
        5.3.4 AO染色
        5.3.5 細(xì)胞內(nèi)ROS水平檢測(cè)
        5.3.6 細(xì)胞周期分析
        5.3.7 細(xì)胞凋亡率檢測(cè)
        5.3.8 細(xì)胞內(nèi)目標(biāo)蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)
        5.3.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 S-層蛋白對(duì)HCT116和CCD841 Co N細(xì)胞活性及數(shù)目的影響
        5.4.2 S-層蛋白對(duì)HCT116細(xì)胞凋亡的影響
        5.4.3 S-層蛋白對(duì)HCT116細(xì)胞自噬的影響
        5.4.4 S-層蛋白對(duì)HCT116 細(xì)胞內(nèi)PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路的影響
        5.4.5 S-層蛋白對(duì)HCT116 細(xì)胞內(nèi)MAPK信號(hào)通路的影響
        5.4.6 S-層蛋白對(duì)HCT116 細(xì)胞內(nèi)ROS分泌水平的影響
        5.4.7 ROS對(duì) S-層蛋白誘導(dǎo)的HCT116 細(xì)胞自噬的影響
        5.4.8 S-層蛋白對(duì)HCT116細(xì)胞周期的影響
    5.5 本章小結(jié)
第六章 乳桿菌S-層蛋白激活自噬緩解巨噬細(xì)胞炎癥的相關(guān)機(jī)制
    6.1 前言
    6.2 實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備
        6.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株與試劑
        6.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備
    6.3 實(shí)驗(yàn)方法
        6.3.1 乳桿菌S-層蛋白的制備
        6.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        6.3.3 LPS誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞炎癥模型的建立
        6.3.4 細(xì)胞分組處理
        6.3.5 細(xì)胞內(nèi)NO和PGE2的分泌水平檢測(cè)
        6.3.6 細(xì)胞內(nèi)目標(biāo)蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)
        6.3.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析
    6.4 結(jié)果與討論
        6.4.1 S-層蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)自噬活性的影響
        6.4.2 S-層蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路的影響
        6.4.3 S-層蛋白對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)NF-κB p65 核轉(zhuǎn)位的影響
        6.4.4 NF-κB抑制劑對(duì)RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)自噬活性的影響
        6.4.5 NF-κB抑制劑對(duì)RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)NO和 PGE2分泌水平的影響
        6.4.6 S-層蛋白基于自噬對(duì)RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)NF-κB信號(hào)通路的影響
        6.4.7 S-層蛋白基于自噬對(duì)RAW264.7 細(xì)胞內(nèi)NO和 PGE2分泌水平的影響
    6.5 本章小結(jié)
論文主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
論文創(chuàng)新點(diǎn)
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄 :作者在攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3718404