人源溶菌酶（Human lysozyme,HLZ）是一種糖苷水解酶,具有抗菌消炎的作用,其作為抗生素的替代品,已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于食品業(yè)、畜牧業(yè)和醫(yī)療等領(lǐng)域。如何獲得高產(chǎn)量、高活性、高純度的人源溶菌酶一直是亟待解決的技術(shù)問題。優(yōu)化人源溶菌酶編碼基因密碼子,提高其在大腸桿菌中的適應(yīng)度和表達(dá)量;將優(yōu)化的基因克隆至大腸桿菌表達(dá)質(zhì)粒pET21a,并將其在大腸桿菌表達(dá)菌株BL21（DE3）中誘導(dǎo)表達(dá);利用8 mol/L尿素溶液對包涵體進(jìn)行溶解變性后,探究一步透析、梯度透析和梯度稀釋3種復(fù)性方式以及復(fù)性液中谷胱甘肽氧化還原對（GSSG/GSH）、精氨酸、甘油等復(fù)性物的濃度對重組人源溶菌酶復(fù)性的效果,獲得最佳的復(fù)性方案。研究結(jié)果表明:37℃誘導(dǎo)溫度下,利用0.5 mmol/L IPTG成功誘導(dǎo)了分子量約為14.7 kD的重組人源溶菌酶的表達(dá),包涵體表達(dá)量約為380 mg/L（濕重）。包涵體經(jīng)一步透析、梯度透析和梯度稀釋3種復(fù)性方式復(fù)性后,測得比活力值分別為147 U/mg、335 U/mg、176 U/mg,表明最佳復(fù)性方法為梯度透析復(fù)性法。進(jìn)一步探索了復(fù)性液中GSSG/GSH比值、精氨酸濃度、甘油濃度... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 質(zhì)粒和菌株
        1.1.2 酶和試劑
        1.1.3 儀器與設(shè)備
    1.2 方法
        1.2.1 人源溶菌酶基因的優(yōu)化與合成
        1.2.2 在大腸桿菌中表達(dá)重組人源溶菌酶表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.3 人源溶菌酶在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)及可溶性檢測
        1.2.4 人源溶菌酶包涵體復(fù)性條件的研究
            1.2.4.1 復(fù)性方式對人源溶菌酶復(fù)性的影響
            1.2.4.2 GSSG/GSH濃度比值對人源溶菌酶復(fù)性的影響
            1.2.4.3 精氨酸濃度對人源溶菌酶復(fù)性的影響
            1.2.4.4 甘油濃度對人源溶菌酶復(fù)性的影響
        1.2.5 人源溶菌酶抗菌活性的檢測
2 結(jié)果
    2.1 人源溶菌酶基因的優(yōu)化與合成
    2.2 在大腸桿菌中表達(dá)重組人源溶菌酶表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.3 人源溶菌酶的誘導(dǎo)表達(dá)及可溶性檢測
    2.4 人源溶菌酶包涵體復(fù)性條件的研究
        2.4.1 復(fù)性方式對人源溶菌酶復(fù)性的影響
        2.4.2 GSSG/GSH濃度比值對人源溶菌酶復(fù)性的影響
        2.4.3 精氨酸濃度對人源溶菌酶復(fù)性的影響
        2.4.4 甘油濃度對人源溶菌酶復(fù)性的影響
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重組人溶菌酶的研究進(jìn)展[J]. 龐戀蘇,李亞男.  中華老年口腔醫(yī)學(xué)雜志. 2017(05)
[2]溶菌酶及在釘螺中表達(dá)的研究進(jìn)展[J]. 朱秀安,黃漢韜,杜康,汪安云,趙勁松.  中國血吸蟲病防治雜志. 2016(01)
[3]包涵體蛋白體外復(fù)性的研究進(jìn)展[J]. 方敏,黃華樑.  生物工程學(xué)報(bào). 2001(06)



本文編號：3715058