為探討小鼠CYP2J5的結(jié)構(gòu)特征及生物學(xué)功能,首先通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析了小鼠CYP2J5基因組織差異表達(dá),然后采用生物信息學(xué)工具進(jìn)行了CYP2J5蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的預(yù)測(cè)和分析;為進(jìn)一步探索和驗(yàn)證CYP2J5生物學(xué)功能及對(duì)脂代謝和性激素合成的影響,基于基因工程技術(shù)構(gòu)建CYP2J5基因的超表達(dá)載體,并通過Western Blot確認(rèn)構(gòu)建的載體能正確表達(dá)CYP2J5基因。最終將構(gòu)建的CYP2J5超表達(dá)載體導(dǎo)入小鼠TM3細(xì)胞,通過qPCR分析了脂代謝和性激素合成相關(guān)基因表達(dá)。結(jié)果顯示,小鼠CYP2J5基因在肝臟和腎臟中高水平表達(dá),該基因?qū)倏扇苄园|(zhì)蛋白質(zhì),蛋白質(zhì)二、三級(jí)結(jié)構(gòu)主要以α-螺旋和無規(guī)則卷曲為主,有信號(hào)肽存在并在第13～35及75～97個(gè)氨基酸之間存在跨膜區(qū),其主要功能是參與細(xì)胞脂代謝和脂肪酸代謝等生物調(diào)節(jié)過程。在TM3細(xì)胞中超表達(dá)CYP2J5基因后,脂代謝與性激素通路關(guān)鍵基因有顯著變化。結(jié)果為CYP2J5基因功能的研究與開發(fā)利用提供了生物信息學(xué)和分子生物學(xué)方面的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。 

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 供試動(dòng)物
        1.1.2 主要試劑與儀器
    1.2 方法
        1.2.1 CYP2J5基因組織差異表達(dá)
        1.2.2 生物信息學(xué)分析
        1.2.3 引物設(shè)計(jì)與合成
        1.2.4 CYP2J5基因擴(kuò)增和克隆
        1.2.5 真核超表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.6 重組載體表達(dá)分析
        1.2.7 脂代謝與性激素通路基因檢測(cè)
2 結(jié)果與分析
    2.1 小鼠不同組織中CYP2J5表達(dá)水平
    2.2 生物信息學(xué)分析
        2.2.1 理化性質(zhì)分析
        2.2.2 疏水性分析
        2.2.3 信號(hào)肽及跨膜信號(hào)分析
        2.2.4 亞細(xì)胞定位分析
        2.2.5 分子功能預(yù)測(cè)分析
        2.2.6 結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
    2.3 Overlap-PCR擴(kuò)增CYP2J5基因與TA克隆
    2.4 CYP2J5真核超表達(dá)載體構(gòu)建
    2.5 超表達(dá)載體表達(dá)分析
    2.6 脂代謝與性激素相關(guān)基因檢測(cè)
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]酵母雙雜交篩選與小鼠維生素D受體互作的蛋白[J]. 張濤,白皓,王令,路宏朝,杜偉立,劉歡,楊理凱.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2018(09)
[2]CYP2J2及EETs通過抗氧化應(yīng)激和抗凋亡減輕肺缺血再灌注損傷[J]. 陳文樹,鄭冠英,平偉,付向?qū)?張霓,王家寧.  華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2018(01)

博士論文
[1]CYP表氧化酶2J2及其代謝產(chǎn)物EETs調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化改善高脂飲食誘導(dǎo)的胰島素抵抗[D]. 戴梅艷.華中科技大學(xué) 2016

碩士論文
[1]麥冬皂苷D通過CYP2J3/EETs系統(tǒng)發(fā)揮心肌保護(hù)作用的分子機(jī)制研究[D]. 油文亭.安徽醫(yī)科大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3706788