[目的]ε-環(huán)化酶（lycopeneε-cyclase,LYCE）可將番茄紅素環(huán)化,并與番茄紅素β-環(huán)化酶共同作用合成α-胡蘿卜素,參與植物體內(nèi)類胡蘿卜素的合成途徑。富含β-胡蘿卜素的杜氏鹽藻（Dunaliella Salina）LYCE功能還未解析。[方法]本文利用RT-PCR分離杜氏鹽藻DsLYCE基因ORF,并克隆到植物表達(dá)載體pCAMBIA1303、構(gòu)建DsLYCE組成型表達(dá)載體pCAMBIA1303-DsLYCE。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)滲入法在煙草葉組織中瞬時表達(dá)DsLYCE,鑒定DsLYCE功能。[結(jié)果]煙葉生理生化分析顯示,與野生型和空載體對照相比,DsLYCE瞬時表達(dá)的煙葉組織中類胡蘿卜素積累顯著提高（P＜0.05）,含量增加了24%。相似地,轉(zhuǎn)DsLYCE基因的煙草葉片中葉綠素a和葉綠素b含量也明顯高于野生型空載對照煙草。這表明杜氏鹽藻DsLYCE基因異源表達(dá)不僅能促進(jìn)宿主細(xì)胞類胡蘿卜素的合成與積累,而且還可以改善宿主細(xì)胞的光合作用。[結(jié)論]本研究為深入解析杜氏鹽藻DsLYCE參與類胡蘿卜素生物合成的分子機(jī)制以及應(yīng)用于其他植物的色素代謝遺傳改良提供科學(xué)參考。 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 植物材料
    1.2 菌株、質(zhì)粒及試劑
    1.3 杜氏鹽藻總RNA的提取
    1.4 杜氏鹽藻LYCE基因的擴(kuò)增
    1.5 構(gòu)建植物表達(dá)載體pCAMBIA1303+DsLYCE
    1.6 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草瞬時表達(dá)分析
    1.7 煙草瞬時表達(dá)葉片GUS染色
    1.8 煙草瞬時表達(dá)的PCR檢測
    1.9 煙草葉片色素提取及測定
2 結(jié)果
    2.1 杜氏鹽藻LYCE基因cDNA克隆
    2.2 pCAMBIA1303-DsLYCE表達(dá)載體的雙酶切鑒定
    2.3 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化檢測結(jié)果
    2.4 煙草葉片GUS染色
    2.5 煙草瞬時表達(dá)PCR檢測結(jié)果
    2.6 DsLYCE瞬時表達(dá)對煙草葉片類胡蘿卜素及葉綠素含量的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]杜氏鹽藻LYCB基因克隆及在鹽脅迫下的表達(dá)分析[J]. 安茜,周雅莉,宋亞楠,岳敏,趙熙寧,王計平,李潤植.  山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2018(10)
[2]葡萄糖誘導(dǎo)綠色杜氏藻轉(zhuǎn)錄組及相關(guān)通路差異分析[J]. 朱帥旗,龔一富,劉浩,章麗,王何瑜.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2015(08)
[3]LycE基因?qū)Ψ训倪z傳轉(zhuǎn)化[J]. 抗艷紅,季靜,吳東,王罡.  北方園藝. 2006(05)

博士論文
[1]玉米類胡蘿卜素異構(gòu)酶和番茄紅素ε-環(huán)化酶基因的克隆與鑒定[D]. 李群睿.東北師范大學(xué) 2010

碩士論文
[1]巴氏杜氏藻類胡蘿卜素異構(gòu)酶基因的分子克隆及外源表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建[D]. 梁穎婕.華南理工大學(xué) 2016
[2]巴氏杜氏藻番茄紅素β-環(huán)化酶基因的克隆及其啟動子的活性研究[D]. 陸燕.華南理工大學(xué) 2013
[3]中國水仙花色相關(guān)基因ZDS、LYCE的克隆[D]. 江琳玉.福建農(nóng)林大學(xué) 2009



本文編號：3704962