為了建立穩(wěn)定、高效的瓜葉菊遺傳轉(zhuǎn)化體系,本試驗(yàn)以瓜葉菊無(wú)菌苗莖段作為外植體,采用農(nóng)桿菌EHA105介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化eGFP基因。探討了不同菌液濃度,共培養(yǎng)時(shí)間,硫酸卡那霉素（Kan）和特美汀（Tim）濃度,乙酰丁香酮（AS）和表面活性劑Silwet L-77濃度,以及浸泡時(shí)間、超聲波和真空滲入處理對(duì)外植體生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)化率的影響。結(jié)果表明:在瓜葉菊葉片中成功檢測(cè)到eGFP基因的瞬時(shí)表達(dá),農(nóng)桿菌菌液OD600為1.0,共培養(yǎng)3 d時(shí)最有利于農(nóng)桿菌與外植體的融合生長(zhǎng);40 mg/L Kan和200 mg/L Tim可以分別作為有效的外植體篩選壓和抑菌濃度;100μmol/L AS和0.03%Silwet L-77能有效地誘導(dǎo)愈傷組織和提高轉(zhuǎn)化率;浸泡30 min、超聲波60 s和真空滲入30 s都能促進(jìn)愈傷組織的形成及提高轉(zhuǎn)化率。 

【文章頁(yè)數(shù)】：9 頁(yè)

【文章目錄】：
1 結(jié)果與分析
    1.1 e GFP基因的瞬時(shí)表達(dá)
    1.2 菌液濃度對(duì)外植體共培養(yǎng)的影響
    1.3 共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)轉(zhuǎn)化外植體及農(nóng)桿菌生長(zhǎng)的影響
    1.4 Kan及Tim培養(yǎng)基濃度對(duì)外植體生長(zhǎng)的影響
    1.5 菌液中AS和Silwet L-77濃度對(duì)外植體愈傷組織誘導(dǎo)與轉(zhuǎn)化率的影響
    1.6 菌液浸泡時(shí)間對(duì)外植體存活率與轉(zhuǎn)化率的影響
    1.7 超聲波和真空滲入處理對(duì)外植的影響
2 討論
    2.1 農(nóng)桿菌菌液濃度對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響
    2.2 共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響
    2.3 Kan及Tim濃度對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響
    2.4 AS和Silwet L-77濃度對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響
    2.5 浸泡時(shí)間、超聲波和真空滲入對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響
3 材料與方法
    3.1 試驗(yàn)材料
    3.2 p KSE402-e GFP基因質(zhì)粒擴(kuò)增及轉(zhuǎn)化大腸桿菌
    3.3 農(nóng)桿菌EHA105菌液制備
    3.4 菌液濃度OD600值篩選
    3.5 共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)外植體的轉(zhuǎn)化
    3.6 Kan及Tim培養(yǎng)基的濃度篩選
    3.7 AS和Silwet L-77的濃度篩選
    3.8 菌液浸泡時(shí)間對(duì)外植體轉(zhuǎn)化試驗(yàn)
    3.9 超聲波和真空滲入法轉(zhuǎn)化外植體試驗(yàn)
作者貢獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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