畢赤酵母是使用最廣泛、最具有發(fā)展前景的異源蛋白表達(dá)系統(tǒng)之一。在畢赤酵母GS115中實現(xiàn)了來源于棉鈴蟲（Helicoverpa armigera）葡萄糖氧化酶基因hagox的異源表達(dá)。以棉鈴蟲hagox基因連接pPICZαA質(zhì)粒構(gòu)建重組表達(dá)載體,電擊轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115H菌株后得到含有hagox基因的重組酵母菌株。通過平板顯色、酶活力測定和SDS-PAGE分析,重組酵母中HaGOX成功表達(dá)。HaGOX含606個氨基酸,理論分子量66.9 kD,預(yù)測等電點pH 4.78。經(jīng)測試重組HaGOX的最適pH為6.0～7.0,最適溫度為40℃,對6-脫氧-葡萄糖和D-葡萄糖具有高催化活力,以D-葡萄糖為底物的比活力為13.63 U·mg^-1,對其他吡喃糖和二糖沒有催化活力。 

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
        1.1.1 棉鈴蟲、菌株與質(zhì)粒
        1.1.2 試劑與儀器
        1.1.3 培養(yǎng)基
            ①YPDZ培養(yǎng)基:
            ②10×酵母無氨基氮源(YNB):
            ③500×生物素:
            ④PTM1微量鹽:
            ⑤酵母發(fā)酵鹽基礎(chǔ)培養(yǎng)基:
            ⑥酵母發(fā)酵鹽誘導(dǎo)培養(yǎng)基:
    1.2 試驗方法
        1.2.1 棉鈴蟲葡萄糖氧化酶基因hagox克隆
        1.2.2 重組表達(dá)載體pPICZαA/HaGOX的構(gòu)建及基因序列分析
        1.2.3 重組表達(dá)載體pPICZαA/HaGOX轉(zhuǎn)化酵母及誘導(dǎo)表達(dá)
        1.2.4 重組HaGOX蛋白的純化
        1.2.5 酶蛋白濃度測定
        1.2.6 葡萄糖氧化酶活力的測定
        1.2.7 重組HaGOX酶學(xué)性質(zhì)測定
2 結(jié)果與分析
    2.1 重組HaGOX酵母表達(dá)載體的構(gòu)建及hagox基因分析
    2.2 重組葡萄糖氧化酶HaGOX的表達(dá)分析
    2.3 HaGOX酶學(xué)性質(zhì)分析
        2.3.1 溫度和pH對酶活的影響
        2.3.2 金屬離子及化學(xué)試劑對HaGOX酶活力的影響
        2.3.3 HaGOX的底物特異性分析
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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