結(jié)直腸癌是全球第三大常見惡性腫瘤,近年來其發(fā)病率和死亡率在發(fā)展中國家不斷增加。目前腫瘤治療藥物主要通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制腫瘤生長,大多數(shù)癌細(xì)胞由于細(xì)胞凋亡機(jī)制失調(diào)而具有耐藥性。Necroptosis是一種Caspase非依賴性細(xì)胞死亡方式,主要通過RIPK1和RIPK3嚴(yán)格調(diào)控,并且由MLKL執(zhí)行完成。細(xì)胞受到內(nèi)源性和外源性因素影響時(shí),可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生DNA損傷（DSBs）,而DNA的DSBs是最嚴(yán)重的一種損傷。細(xì)胞發(fā)生DSBs后會(huì)激活細(xì)胞周期檢查點(diǎn),協(xié)調(diào)修復(fù)DNA損傷,調(diào)節(jié)基因表達(dá)。DSBs損傷分子標(biāo)記物γH2AX在Necroptosis過程中會(huì)招募線粒體中的AIF易位形成DNA降解復(fù)合物,DNA DSBs的產(chǎn)生對染色質(zhì)的溶解具有重要作用。Necroptosis為癌癥治療提供了新策略。本實(shí)驗(yàn)室已從黍糠中提取出一種含血紅素輔基的陽離子過氧化物酶（proso millet peroxidase,PmPOD）,并且發(fā)現(xiàn)PmPOD可以誘導(dǎo)HCT116和HT29細(xì)胞發(fā)生RIPK1和RIPK3依賴性Necroptosis。雖然其確切的分子機(jī)制仍不清楚,但最近研究發(fā)現(xiàn)PmPOD可通過體外水解機(jī)制切割D... 

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 結(jié)直腸癌簡介
    1.2 壞死性凋亡
    1.3 DNA損傷應(yīng)答
        1.3.1 ATM-CHK2信號(hào)通路
        1.3.2 ATR-CHK1信號(hào)通路
    1.4 黍子過氧化物酶
    1.5 研究目的及意義
第二章 PmPOD通過胞飲作用進(jìn)入細(xì)胞
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 細(xì)胞活力檢測
        2.3.3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        2.3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測
        2.3.5 免疫熒光染色
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 PmPOD對結(jié)直腸癌細(xì)胞形態(tài)的影響
        2.4.2 PmPOD對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的影響
        2.4.3 PmPOD誘導(dǎo)HCT116和HT29細(xì)胞Necroptosis
        2.4.4 PmPOD在結(jié)直腸癌細(xì)胞核中定位
        2.4.5 細(xì)胞膜膽固醇降低抑制PmPOD誘導(dǎo)細(xì)胞增殖
        2.4.6 細(xì)胞膜膽固醇降低對PmPOD定位的影響
    2.5 討論
第三章 PmPOD誘導(dǎo)細(xì)胞DNA損傷
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞周期檢測
        3.3.2 單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
        3.3.3 細(xì)胞核形態(tài)觀察
        3.3.4 免疫熒光染色
        3.3.5 Western Blot檢測
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 PmPOD誘導(dǎo)HCT116和HT29細(xì)胞周期停滯于S期
        3.4.2 PmPOD對細(xì)胞核形態(tài)的影響
        3.4.3 PmPOD誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞DSBs
        3.4.4 PmPOD誘導(dǎo)DNA損傷發(fā)生在Necroprosis上游
        3.4.5 PmPOD誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞形成γH2AX
        3.4.6 PmPOD誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞γH2AX表達(dá)量上調(diào)
        3.4.7 PmPOD誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞形成p-ATM病灶
        3.4.8 PmPOD誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞Lamin B1解聚
    3.5 討論
第四章 PmPOD誘導(dǎo)的DNA損傷和Necroptosis與p53表達(dá)有關(guān)
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
        4.3.2 MTT檢測
        4.3.3 siRNA p53干擾
        4.3.4 pCMV3-TP53-myc質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        4.3.5 Western Blot
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 siRNA p53對細(xì)胞活力的影響
        4.4.2.siRNA p53對PmPOD誘導(dǎo)細(xì)胞DSBs的影響
        4.4.3.p53異位表達(dá)對細(xì)胞活力的影響
        4.4.4.p53異位表達(dá)對PmPOD誘導(dǎo)DSBs的影響
    4.5 討論
小結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡況及聯(lián)系方式



本文編號(hào)：3680181