相干擾素調(diào)節(jié)因子（IRFs）,是一類與先天免疫相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子家族,參與干擾素（IFN）及干擾素刺激基因（ISGs）的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。IRF家族成員包括哺乳類的9個成員,鳥類的10個成員以及硬骨魚類的11個成員。IRF家族成員在抗病毒感染、參與先天性免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答、調(diào)節(jié)細胞凋亡與分化等方面發(fā)揮重要生物學(xué)作用。其中,對于干擾素調(diào)節(jié)因子3（IRF3）與干擾素調(diào)節(jié)因子7（IRF7）的研究較為深入。近幾年關(guān)于IRFs的研究表明,干擾素調(diào)節(jié)因子5（IRF5）能在RIG-I信號通路及Toll-like信號通路中發(fā)揮作用。對于哺乳類IRF5的研究主要集中在其參與調(diào)節(jié)自身免疫性疾病,魚類中IRF5基因逐漸被克隆鑒定,魚類IRF5的作用也漸漸被報道。但是對于硬骨魚中IRF5功能的研究及其與干擾素調(diào)節(jié)因子家族之間的關(guān)系,相關(guān)研究報道甚少。因此,本文主要研究Ci IRF5對IFN的轉(zhuǎn)錄調(diào)控,以及Ci IRF5與Ci IRF3對IFN協(xié)同上調(diào)的調(diào)控機制,從而進一步驗證Ci IRF5與Ci IRF3在魚類抗病毒免疫反應(yīng)的重要地位。首先,我們通過檢測脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）感染誘導(dǎo)后,... 

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 前言
    1.1 干擾素
    1.2 干擾素調(diào)節(jié)因子家族(IRFs)
    1.3 干擾素調(diào)節(jié)因子
        1.3.1 IRF5 的生理功能
        1.3.2 IRF5 的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
        1.3.3 魚類IRF5 的研究進展
    1.4 研究目的與意義
第2章 材料與方法
    2.1 實驗儀器與材料
        2.1.1 細胞株、菌種與質(zhì)粒載體
        2.1.2 主要儀器與試劑
    2.2 相關(guān)軟件
    2.3 引物表
    2.4 實驗方法
        2.4.1 草魚IRF5 開放閱讀框的克隆
        2.4.2 IRF5和IRF3 表達載體的構(gòu)建
        2.4.3 細胞培養(yǎng)
        2.4.4 LPS刺激后草魚IRF5 在細胞中表達水平檢測
        2.4.5 草魚IRF5對IFN的轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析
        2.4.6 草魚IRF5與IRF3對IFN轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析
        2.4.7 免疫共沉淀
        2.4.8 GST-pull down實驗
        2.4.9 草魚IRF5在CIK細胞中的分布
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 草魚IRF5 基因的定量表達分析
    3.2 草魚IRF5 重組質(zhì)粒的鑒定
    3.3 草魚IRF5 上調(diào)IFN的轉(zhuǎn)錄
    3.4 草魚IRF5與IRF3 協(xié)同上調(diào)IFN的轉(zhuǎn)錄
    3.5 草魚IRF5與IRF3 免疫共沉淀
        3.5.1 真核表達載體的標(biāo)簽檢測
        3.5.2 草魚IRF5與IRF3 體內(nèi)結(jié)合
    3.6 草魚IRF5與IRF3的GST-pulldown
    3.7 LPS刺激草魚IRF5 的核移位
    3.8 草魚IRF5 分布在細胞質(zhì)
第4章 討論
第5章 主要結(jié)論與展望
    6.1 主要結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新點
    6.3 展望
致謝
參考文獻



本文編號：3669325