Syk是一種蛋白酪氨酸激酶,由629個氨基酸所組成,主要參與機體內(nèi)多種信號通路的信號傳導。以往對于Syk的研究大多選取高等哺乳動物為實驗對象,而到目前為止Syk在低等脊椎動物中的研究少之甚少,由于七鰓鰻不僅是現(xiàn)存的低等無頜類脊椎動物的重要代表,而且還是無脊椎動物向脊椎動物進化過程中具有承上啟下意義的一個重要類群。因此,本文選取七鰓鰻這種無頜類脊椎動物為研究實驗對象,探索Lja-Syk分子在七鰓鰻免疫應答過程中的作用。其目的在于既可以揭示Lja-Syk分子從低等到高等脊椎動物的分子進化進程,也進一步為深入了解無頜類脊椎動物免疫應答的分子機制奠定了實驗基礎。在本實驗的研究基礎之上,對Syk截短序列構建表達載體進行誘導表達,純化后得到Lja-Syk的可溶性重組蛋白。隨后以重組蛋白Lja-Syk為抗原,通過對新西蘭兔（Oryctolagus cuniculus）進行皮下多點注射免疫,制備Lja-Syk的兔源多克隆抗體。通過ELISA方法檢測分析,在第三次加強免疫后檢測,抗體的效價能達到1:521 000。純化后的抗體經(jīng)免疫印跡實驗檢測其對Lja-Syk重組蛋白以及天然蛋白都有較強的特異性。為了... 

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 Syk的分子結構特點
    1.2 Syk與癌癥的關系
        1.2.1 Syk與卵巢癌的關系
        1.2.2 Syk與胃癌的關系
    1.3 Syk與白血病的關系
        1.3.1 Syk與慢性淋巴細胞白血病的關系
        1.3.2 Syk與急型髓系白血病的關系
    1.4 小結
第2章 七鰓鰻Lja-Syk分子的誘導表達及蛋白純化
    2.1 材料
    2.2 方法
        2.2.1 目的基因的蛋白誘導表達
        2.2.2 可溶性蛋白鑒定
        2.2.3 SDS-PAGE鑒定
        2.2.4 目的蛋白純化
        2.2.5 蛋白濃度的測定
    2.3 結果
        2.3.1 重組蛋白Lja-Syk的誘導表達
        2.3.2 純化后的重組蛋白Lja-Syk
        2.3.3 Lja-Syk重組蛋白質(zhì)譜分析
    2.4 討論
    2.5 小結
第3章 七鰓鰻Lja-Syk多克隆抗體制備及其鑒定
    3.1 材料
    3.2 方法
        3.2.1 免疫方法
        3.2.2 免疫印跡法(WB)檢測Lja-Syk多克隆抗體的效價
        3.2.3 Lja-Syk多克隆抗體的純化
    3.3 結果
        3.3.1 ELISA法檢測兔源Lja-Syk多克隆抗體的效價
        3.3.2 免疫印跡技術檢測Lja-Syk多克隆抗體的特異性
    3.4 討論
    3.5 小結
第4章 七鰓鰻Lja-Syk相關的免疫學研究
    4.1 七鰓鰻Lja-Syk在 mRNA水平上在各組織中的相對表達量
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
        4.1.3 結果
    4.2 七鰓鰻Syk在蛋白水平上在各組織中的相對表達量
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
        4.2.3 結果
    4.3 討論
    4.4 小結
第5章 Lja-Syk基因的siRNA干擾初探
    5.1 siRNA干擾Lja-Syk在七鰓鰻中mRNA水平上各組織中的相對表達量
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
        5.1.3 結果
    5.2 siRNA干擾Lja-Syk在七鰓鰻中蛋白水平水平上各組織中的相對表達量
        5.2.1 材料
        5.2.2 方法
        5.2.3 結果
    5.3 討論
    5.4 小結
結論
本文創(chuàng)新點
參考文獻
附錄 A 七鰓鰻Syk mRNA全序列
附錄 B 重組蛋白純化后的蛋白濃度曲線
附錄 C 抗體純化后的抗體濃度曲線
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Correlation of tumor-positive ratio and number of perigastric lymph nodes with prognosis of patients with surgically-removed gastric carcinoma[J]. Yong-Bin Ding Guo-Yu Chen Jian-Guo Xia Xi-Wei Zang Hong-Yu Yang Li Yang Department of General Surgery,First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210029,Jiangsu Province,ChinaYue-Xian Liu Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210029,Jiangsu Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2004(02)



本文編號：3656516