Syk是一種蛋白酪氨酸激酶,由629個(gè)氨基酸所組成,主要參與機(jī)體內(nèi)多種信號(hào)通路的信號(hào)傳導(dǎo)。以往對(duì)于Syk的研究大多選取高等哺乳動(dòng)物為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,而到目前為止Syk在低等脊椎動(dòng)物中的研究少之甚少,由于七鰓鰻不僅是現(xiàn)存的低等無(wú)頜類脊椎動(dòng)物的重要代表,而且還是無(wú)脊椎動(dòng)物向脊椎動(dòng)物進(jìn)化過(guò)程中具有承上啟下意義的一個(gè)重要類群。因此,本文選取七鰓鰻這種無(wú)頜類脊椎動(dòng)物為研究實(shí)驗(yàn)對(duì)象,探索Lja-Syk分子在七鰓鰻免疫應(yīng)答過(guò)程中的作用。其目的在于既可以揭示Lja-Syk分子從低等到高等脊椎動(dòng)物的分子進(jìn)化進(jìn)程,也進(jìn)一步為深入了解無(wú)頜類脊椎動(dòng)物免疫應(yīng)答的分子機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。在本實(shí)驗(yàn)的研究基礎(chǔ)之上,對(duì)Syk截短序列構(gòu)建表達(dá)載體進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),純化后得到Lja-Syk的可溶性重組蛋白。隨后以重組蛋白Lja-Syk為抗原,通過(guò)對(duì)新西蘭兔（Oryctolagus cuniculus）進(jìn)行皮下多點(diǎn)注射免疫,制備Lja-Syk的兔源多克隆抗體。通過(guò)ELISA方法檢測(cè)分析,在第三次加強(qiáng)免疫后檢測(cè),抗體的效價(jià)能達(dá)到1:521 000。純化后的抗體經(jīng)免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)Lja-Syk重組蛋白以及天然蛋白都有較強(qiáng)的特異性。為了... 

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 Syk的分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
    1.2 Syk與癌癥的關(guān)系
        1.2.1 Syk與卵巢癌的關(guān)系
        1.2.2 Syk與胃癌的關(guān)系
    1.3 Syk與白血病的關(guān)系
        1.3.1 Syk與慢性淋巴細(xì)胞白血病的關(guān)系
        1.3.2 Syk與急型髓系白血病的關(guān)系
    1.4 小結(jié)
第2章 七鰓鰻Lja-Syk分子的誘導(dǎo)表達(dá)及蛋白純化
    2.1 材料
    2.2 方法
        2.2.1 目的基因的蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.2 可溶性蛋白鑒定
        2.2.3 SDS-PAGE鑒定
        2.2.4 目的蛋白純化
        2.2.5 蛋白濃度的測(cè)定
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 重組蛋白Lja-Syk的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3.2 純化后的重組蛋白Lja-Syk
        2.3.3 Lja-Syk重組蛋白質(zhì)譜分析
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 七鰓鰻Lja-Syk多克隆抗體制備及其鑒定
    3.1 材料
    3.2 方法
        3.2.1 免疫方法
        3.2.2 免疫印跡法(WB)檢測(cè)Lja-Syk多克隆抗體的效價(jià)
        3.2.3 Lja-Syk多克隆抗體的純化
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 ELISA法檢測(cè)兔源Lja-Syk多克隆抗體的效價(jià)
        3.3.2 免疫印跡技術(shù)檢測(cè)Lja-Syk多克隆抗體的特異性
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 七鰓鰻Lja-Syk相關(guān)的免疫學(xué)研究
    4.1 七鰓鰻Lja-Syk在 mRNA水平上在各組織中的相對(duì)表達(dá)量
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
        4.1.3 結(jié)果
    4.2 七鰓鰻Syk在蛋白水平上在各組織中的相對(duì)表達(dá)量
        4.2.1 材料
        4.2.2 方法
        4.2.3 結(jié)果
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
第5章 Lja-Syk基因的siRNA干擾初探
    5.1 siRNA干擾Lja-Syk在七鰓鰻中mRNA水平上各組織中的相對(duì)表達(dá)量
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
        5.1.3 結(jié)果
    5.2 siRNA干擾Lja-Syk在七鰓鰻中蛋白水平水平上各組織中的相對(duì)表達(dá)量
        5.2.1 材料
        5.2.2 方法
        5.2.3 結(jié)果
    5.3 討論
    5.4 小結(jié)
結(jié)論
本文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄 A 七鰓鰻Syk mRNA全序列
附錄 B 重組蛋白純化后的蛋白濃度曲線
附錄 C 抗體純化后的抗體濃度曲線
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Correlation of tumor-positive ratio and number of perigastric lymph nodes with prognosis of patients with surgically-removed gastric carcinoma[J]. Yong-Bin Ding Guo-Yu Chen Jian-Guo Xia Xi-Wei Zang Hong-Yu Yang Li Yang Department of General Surgery,First Affiliated Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210029,Jiangsu Province,ChinaYue-Xian Liu Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210029,Jiangsu Province,China.  World Journal of Gastroenterology. 2004(02)



本文編號(hào)：3656516