細(xì)胞程序性死亡（PCD）在動(dòng)植物生長(zhǎng)發(fā)育過程中是普遍存在的,靶細(xì)胞在某些發(fā)育和病理?xiàng)l件下最終會(huì)死亡。這對(duì)于控制細(xì)胞數(shù)量,去除不需要的患病或受損細(xì)胞并維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)是至關(guān)重要的。PCD過程在動(dòng)物細(xì)胞中研究較為詳細(xì),但在植物中該過程的研究仍處于初期階段。與僅具有線粒體的動(dòng)物不同,植物具有2個(gè)產(chǎn)生能量的細(xì)胞器——線粒體和葉綠體。葉綠體作為植物細(xì)胞中特有的能量轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞器且產(chǎn)生ROS,這些特征均表明葉綠體也可能參與PCD。在植物PCD過程中,葉綠體介導(dǎo)PCD的作用機(jī)制仍是空白。本試驗(yàn)研究SA誘導(dǎo)黃瓜PCD過程中葉綠素相關(guān)基因的介導(dǎo)作用,結(jié)果如下:（1）分析Illumina高通量測(cè)序技術(shù)方法獲取的SA處理黃瓜葉片的差異表達(dá)基因,在1759個(gè)DEGs結(jié)果中,依據(jù)給定的基因注釋,篩選出與葉綠素合成降解相關(guān)的基因共16個(gè),并利用RT-PCR和qRT-PCR的方法對(duì)這16個(gè)基因進(jìn)行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),以24h為基準(zhǔn),共有14個(gè)基因上調(diào)表達(dá),2個(gè)基因下調(diào)表達(dá)。（2）分析比較16個(gè)葉綠素合成降解相關(guān)基因的RT-PCR和qRT-PCR結(jié)果,從中選取葉綠素合成降解過程中的關(guān)鍵酶基因HEMA1和PaO。對(duì)這兩個(gè)基因進(jìn)行編... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 水楊酸研究進(jìn)展
        1.1.1 水楊酸生物合成研究進(jìn)展
        1.1.2 SA在植物體內(nèi)的修飾
    1.2 SA誘導(dǎo)HR型PCD的研究進(jìn)展
        1.2.1 SA誘導(dǎo)植物HR和SAR
        1.2.2 SA誘導(dǎo)HR作為PCD的證據(jù)
    1.3 PCD中葉綠體的作用
        1.3.1 葉綠體介導(dǎo)植物PCD的證據(jù)
        1.3.2 葉綠體中ROS的形成
        1.3.3 葉綠體產(chǎn)生ROS介導(dǎo)的PCD
        1.3.4 葉綠體Cytf的釋放
    1.4 HEMA1和PaO基因研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的意義、研究?jī)?nèi)容與技術(shù)路線
        1.5.1 本研究的目的意義
        1.5.2 研究?jī)?nèi)容
        1.5.3 本研究的技術(shù)路線
第2章 SA誘導(dǎo)黃瓜葉綠素合成降解酶基因表達(dá)分析
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料的培養(yǎng)和前期處理
        2.1.2 引物
        2.1.3 化學(xué)試劑和試劑盒
        2.1.4 儀器
        2.1.5 營(yíng)養(yǎng)液的配制
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 黃瓜葉片總RNA提取
        2.2.2 cDNA的合成
        2.2.3 葉綠素合成降解相關(guān)基因的表達(dá)檢測(cè)
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 黃瓜總DNA的提取結(jié)果
        2.3.2 黃瓜葉綠素合成降解相關(guān)基因的RT-PCR表達(dá)分析
        2.3.3 SA誘導(dǎo)黃瓜葉綠素合成降解關(guān)鍵酶基因的RT-PCR表達(dá)量分析
    2.4 討論
        2.4.1 葉綠素合成相關(guān)基因的表達(dá)
        2.4.2 葉綠素降解相關(guān)基因的表達(dá)
    2.5 本章小結(jié)
第3章 CsHEMA1和CsPaO基因的編碼區(qū)全長(zhǎng)序列的克隆及生物信息學(xué)分析
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料的培養(yǎng)
        3.1.2 菌株
        3.1.3 化學(xué)試劑和試劑盒
        3.1.4 主要儀器
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 黃瓜總RNA的提取
        3.2.2 基因擴(kuò)增
        3.2.3 CsHEMA1和CsPaO基因cDNA序列克隆
        3.2.4 克隆產(chǎn)物序列測(cè)定及分析
    3.3 結(jié)果分析
        3.3.1 黃瓜CsHEMA1和CsPaO基因克隆及質(zhì)粒雙酶切鑒定
        3.3.2 CsHEMA1和CsPaO基因測(cè)序及生物信息學(xué)分析
    3.4 本章小結(jié)
第4 章超表達(dá)CsHEMA1/PaO和突變體擬南芥分析
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 植物材料培養(yǎng)
        4.1.2 載體和菌株
        4.1.3 化學(xué)試劑和試劑盒
        4.1.4 藥品及培養(yǎng)基配制
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 超表達(dá)載體構(gòu)建
        4.2.2 超表達(dá)和突變體擬南芥的檢測(cè)
        4.2.3 超表達(dá)和突變體擬南芥的基因特征分析
        4.2.4 SA處理超表達(dá)和突變體擬南芥的DAB和 NBT染色
        4.2.5 SA處理超表達(dá)擬南芥的抗氧化酶活性測(cè)定
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 超表達(dá)載體pBI121-CsHEMA1/PaO構(gòu)建及雙酶切驗(yàn)證
        4.3.2 超表達(dá)和突變體擬南芥的鑒定
        4.3.3 超表達(dá)和突變體的擬南芥生長(zhǎng)與生理分析
        4.3.4 SA處理超表達(dá)和突變體擬南芥的DAB和 NBT染色分析
        4.3.5 SA處理超表達(dá)擬南芥的抗氧化酶活性測(cè)定分析
    4.4 討論
        4.4.1 HEMA1基因的功能
        4.4.2 PaO基因的功能
        4.4.3 ROS爆發(fā)與PCD
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蘋果異分支酸合酶基因MdICS1的克隆與表達(dá)分析[J]. 馬長(zhǎng)青,柏素花,董超華,張玉剛,戴洪義.  植物生理學(xué)報(bào). 2016(09)
[2]甘藍(lán)型油菜異分支酸合酶基因的克隆及信號(hào)通路相關(guān)基因的誘導(dǎo)表達(dá)[J]. 彭琦,高建芹,周曉嬰,張潔夫,戚存扣,浦惠明,陳松.  中國(guó)油料作物學(xué)報(bào). 2016(01)
[3]決明異分支酸合酶基因的克隆及表達(dá)分析[J]. 李關(guān)榮,艾義,譚燕,米瑤,朱林蕙,李培江,齊紅藝.  西南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2014(09)

碩士論文
[1]水稻異分支酸合酶和水楊酸羥基化酶的鑒定與功能研究[D]. 趙利.浙江師范大學(xué) 2017



本文編號(hào)：3655215