發(fā)布時間：2022-07-03 16:18

　　細胞程序性死亡（PCD）在動植物生長發(fā)育過程中是普遍存在的,靶細胞在某些發(fā)育和病理條件下最終會死亡。這對于控制細胞數(shù)量,去除不需要的患病或受損細胞并維持細胞穩(wěn)態(tài)是至關重要的。PCD過程在動物細胞中研究較為詳細,但在植物中該過程的研究仍處于初期階段。與僅具有線粒體的動物不同,植物具有2個產(chǎn)生能量的細胞器——線粒體和葉綠體。葉綠體作為植物細胞中特有的能量轉(zhuǎn)導細胞器且產(chǎn)生ROS,這些特征均表明葉綠體也可能參與PCD。在植物PCD過程中,葉綠體介導PCD的作用機制仍是空白。本試驗研究SA誘導黃瓜PCD過程中葉綠素相關基因的介導作用,結(jié)果如下:（1）分析Illumina高通量測序技術方法獲取的SA處理黃瓜葉片的差異表達基因,在1759個DEGs結(jié)果中,依據(jù)給定的基因注釋,篩選出與葉綠素合成降解相關的基因共16個,并利用RT-PCR和qRT-PCR的方法對這16個基因進行分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),以24h為基準,共有14個基因上調(diào)表達,2個基因下調(diào)表達。（2）分析比較16個葉綠素合成降解相關基因的RT-PCR和qRT-PCR結(jié)果,從中選取葉綠素合成降解過程中的關鍵酶基因HEMA1和PaO。對這兩個基因進行編... 

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 水楊酸研究進展
        1.1.1 水楊酸生物合成研究進展
        1.1.2 SA在植物體內(nèi)的修飾
    1.2 SA誘導HR型PCD的研究進展
        1.2.1 SA誘導植物HR和SAR
        1.2.2 SA誘導HR作為PCD的證據(jù)
    1.3 PCD中葉綠體的作用
        1.3.1 葉綠體介導植物PCD的證據(jù)
        1.3.2 葉綠體中ROS的形成
        1.3.3 葉綠體產(chǎn)生ROS介導的PCD
        1.3.4 葉綠體Cytf的釋放
    1.4 HEMA1和PaO基因研究進展
    1.5 本研究的目的意義、研究內(nèi)容與技術路線
        1.5.1 本研究的目的意義
        1.5.2 研究內(nèi)容
        1.5.3 本研究的技術路線
第2章 SA誘導黃瓜葉綠素合成降解酶基因表達分析
    2.1 試驗材料
        2.1.1 植物材料的培養(yǎng)和前期處理
        2.1.2 引物
        2.1.3 化學試劑和試劑盒
        2.1.4 儀器
        2.1.5 營養(yǎng)液的配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 黃瓜葉片總RNA提取
        2.2.2 cDNA的合成
        2.2.3 葉綠素合成降解相關基因的表達檢測
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 黃瓜總DNA的提取結(jié)果
        2.3.2 黃瓜葉綠素合成降解相關基因的RT-PCR表達分析
        2.3.3 SA誘導黃瓜葉綠素合成降解關鍵酶基因的RT-PCR表達量分析
    2.4 討論
        2.4.1 葉綠素合成相關基因的表達
        2.4.2 葉綠素降解相關基因的表達
    2.5 本章小結(jié)
第3章 CsHEMA1和CsPaO基因的編碼區(qū)全長序列的克隆及生物信息學分析
    3.1 試驗材料
        3.1.1 植物材料的培養(yǎng)
        3.1.2 菌株
        3.1.3 化學試劑和試劑盒
        3.1.4 主要儀器
    3.2 試驗方法
        3.2.1 黃瓜總RNA的提取
        3.2.2 基因擴增
        3.2.3 CsHEMA1和CsPaO基因cDNA序列克隆
        3.2.4 克隆產(chǎn)物序列測定及分析
    3.3 結(jié)果分析
        3.3.1 黃瓜CsHEMA1和CsPaO基因克隆及質(zhì)粒雙酶切鑒定
        3.3.2 CsHEMA1和CsPaO基因測序及生物信息學分析
    3.4 本章小結(jié)
第4 章超表達CsHEMA1/PaO和突變體擬南芥分析
    4.1 試驗材料
        4.1.1 植物材料培養(yǎng)
        4.1.2 載體和菌株
        4.1.3 化學試劑和試劑盒
        4.1.4 藥品及培養(yǎng)基配制
    4.2 試驗方法
        4.2.1 超表達載體構(gòu)建
        4.2.2 超表達和突變體擬南芥的檢測
        4.2.3 超表達和突變體擬南芥的基因特征分析
        4.2.4 SA處理超表達和突變體擬南芥的DAB和 NBT染色
        4.2.5 SA處理超表達擬南芥的抗氧化酶活性測定
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 超表達載體pBI121-CsHEMA1/PaO構(gòu)建及雙酶切驗證
        4.3.2 超表達和突變體擬南芥的鑒定
        4.3.3 超表達和突變體的擬南芥生長與生理分析
        4.3.4 SA處理超表達和突變體擬南芥的DAB和 NBT染色分析
        4.3.5 SA處理超表達擬南芥的抗氧化酶活性測定分析
    4.4 討論
        4.4.1 HEMA1基因的功能
        4.4.2 PaO基因的功能
        4.4.3 ROS爆發(fā)與PCD
    4.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
攻讀碩士期間發(fā)表的學術論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]蘋果異分支酸合酶基因MdICS1的克隆與表達分析[J]. 馬長青,柏素花,董超華,張玉剛,戴洪義.  植物生理學報. 2016(09)
[2]甘藍型油菜異分支酸合酶基因的克隆及信號通路相關基因的誘導表達[J]. 彭琦,高建芹,周曉嬰,張潔夫,戚存扣,浦惠明,陳松.  中國油料作物學報. 2016(01)
[3]決明異分支酸合酶基因的克隆及表達分析[J]. 李關榮,艾義,譚燕,米瑤,朱林蕙,李培江,齊紅藝.  西南大學學報(自然科學版). 2014(09)

碩士論文
[1]水稻異分支酸合酶和水楊酸羥基化酶的鑒定與功能研究[D]. 趙利.浙江師范大學 2017



本文編號：3655215