鴨病毒性腸炎（Duck virus enteritis,DVE）,又稱鴨瘟（Duck plague,DP）,是由鴨腸炎病毒（Duck enteritis virus,DEV）引起的鴨,鵝等禽類的一種急性、接觸性傳染病。其特征是死亡率高,給養(yǎng)鴨業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。DEV又稱鴨瘟病毒（Duck plague virus,DPV）,屬于皰疹病毒科。近年來,有研究表明DEV可以引起鴨胚成纖維（Duck embryo fibroblast,DEF）細(xì)胞自噬。且高感染性病毒可以通過影響細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺失衡,導(dǎo)致DEF細(xì)胞死亡。此外,DEV可通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的未折疊蛋白的反應(yīng)誘導(dǎo)自噬。目前,人們把研究的焦點(diǎn)集中于DEV分子生物學(xué),對于相關(guān)細(xì)胞感染DEV后細(xì)胞功能及相關(guān)機(jī)制研究較少。本研究以自噬和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激為研究對象,探討DEV誘導(dǎo)DEF內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞自噬和凋亡以及相關(guān)機(jī)制研究,為闡明DEV感染DEF機(jī)理提供相關(guān)理論基礎(chǔ),為鴨瘟的預(yù)防與控制提供相關(guān)思路。主要研究內(nèi)容如下:1.不同感染復(fù)數(shù)（Multiplicity of infection,MOI）的DEV對DEF增殖和凋... 

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞
文獻(xiàn)綜述
第一章 鴨腸炎病毒對鴨胚成纖維細(xì)胞增殖和凋亡的影響
    1 材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)鴨胚
        1.2 病毒和細(xì)胞
        1.3 主要試劑
        1.4 主要儀器
        1.5 主要溶液的配置
    2 方法
        2.1 DEF制備
        2.2 DEF感染DEV實(shí)驗(yàn)
        2.3 細(xì)胞傳代
        2.4 CCK8試劑盒細(xì)胞增殖檢測
        2.5 流式細(xì)胞術(shù)細(xì)胞凋亡檢測
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 不同感染復(fù)數(shù)(Multiplicity of infection,MOI)的DEV-GZ對DEF活力的影響
        3.2 不同MOI的DEV-GZ對DEF凋亡的影響
    4 討論
第二章 DEF感染DEV后,細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)、自噬及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    1 材料
        1.1 病毒和細(xì)胞
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 常用溶液配制
    2 方法
        2.1 DEF制備
        2.2 DEF感染DEV實(shí)驗(yàn)
        2.3 細(xì)胞傳代
        2.4 熒光顯微鏡檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子
        2.5 Western Blot檢測相關(guān)蛋白
            2.5.1 細(xì)胞總蛋白提取
            2.5.2 蛋白含量測定
            2.5.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)
            2.5.4 轉(zhuǎn)模
            2.5.5 免疫雜交反應(yīng)
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 不同MOI的DEV-GZ對DEF中鈣離子的影響
        3.2 不同MOI的DEV-GZ對DEF中自噬蛋白水平的影響
        3.3 不同MOI的DEV-GZ對DEF中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白水平的影響
    4 討論
第三章 Ca~(2+)螯合劑逆轉(zhuǎn)DEV對DEF感染作用
    1 材料
        1.1 病毒和細(xì)胞
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
    2 方法
        2.1 DEF制備
        2.2 DEF感染DEV實(shí)驗(yàn)
        2.3 鈣離子螯合劑處理細(xì)胞
        2.4 熒光顯微鏡檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子
        2.5 CCK8試劑盒細(xì)胞增殖檢測
        2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡水平
        2.7 Western Blot檢測自噬相關(guān)蛋白
            2.7.1 細(xì)胞總蛋白提取
            2.7.2 蛋白含量測定
            2.7.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)
            2.7.4 轉(zhuǎn)模
            2.7.5 免疫雜交反應(yīng)
        2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 Ca~(2+)螯合劑對DEV-GZ介導(dǎo)的DEF鈣離子水平的影響
        3.2 Ca~(2+)螯合劑對DEV-GZ介導(dǎo)的DEF增殖活力的影響
        3.3 Ca~(2+)螯合劑對DEV-GZ介導(dǎo)的DEF凋亡能力的影響
        3.4 Ca~(2+)螯合劑對DEV-GZ介導(dǎo)的DEF自噬的影響
        3.5 Ca~(2+)螯合劑對DEV-GZ介導(dǎo)的DEF內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    4 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文情況
致謝



本文編號：3654953