大豆【Glycine max（L.）Merr.】屬于豆科、蝶形花亞科、大豆屬,是目前世界范圍內(nèi)種植較廣的重要經(jīng)濟(jì)作物之一,是植物蛋白的主要來源,也是植物油脂的來源之一。由于大豆是古四倍體,大約有75%的基因是以同源基因的形式表現(xiàn)的,其基因組結(jié)構(gòu)復(fù)雜和遺傳轉(zhuǎn)化效率低等原因限制了其功能基因組研究的發(fā)展。隨著大豆基因組測序的初步完成,大豆功能基因組研究也逐漸成為研究的重點(diǎn)。突變體是基因功能研究的重要材料,也是大豆遺傳育種改良的基礎(chǔ)材料。因此,本研究利用60Coγ射線和甲基磺酸乙酯處理大豆“天隆一號(hào)”以構(gòu)建大豆突變體庫以及以花發(fā)育相關(guān)基因Gm PTL和Gm AP1為基礎(chǔ)構(gòu)建CRISPR/Cas9技術(shù)平臺(tái)編輯大豆,獲得大豆花發(fā)育相關(guān)的突變體。具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1.大豆突變體庫的構(gòu)建對誘變后的大豆“天隆一號(hào)”種子的M2和M3代的突變體進(jìn)行表型性狀的調(diào)查和統(tǒng)計(jì),進(jìn)一步篩選分析獲得了包括株型、葉、花、莖、莢等性狀變異的材料140份。其中獲得葉變異材料63份,株型變異材料75份,花變異材料11份,莢變異材料18份;種子變異材料50份,熟期變異材料28份。同一株系存在有不同變異性狀。2.分子標(biāo)記鑒定從大豆... 

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 植物突變體庫研究進(jìn)展
        1.1.1 自發(fā)突變
        1.1.2 物理輻射誘變
        1.1.3 化學(xué)試劑誘變
        1.1.4 生物學(xué)技術(shù)誘變
    1.2 大豆突變體庫研究進(jìn)展
        1.2.1 大豆理化誘變研究進(jìn)展
        1.2.2 CRISPR/Cas9 技術(shù)在大豆基因敲除中的研究進(jìn)展
        1.2.3 大豆轉(zhuǎn)基因技術(shù)的進(jìn)展
        1.2.4 植物花形態(tài)發(fā)育研究進(jìn)展
    1.3 本課題的研究內(nèi)容和意義
第2章 大豆突變體庫的構(gòu)建
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)耗材和儀器
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)溶液的配置
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 誘變處理
        2.2.2 播種與收獲
        2.2.3 表型調(diào)查
        2.2.4 SSR分子檢測
        2.2.5 RT-qPCR基因表達(dá)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 誘變效應(yīng)分析
        2.3.2 性狀分析
        2.3.3 突變體的SSR分子標(biāo)記檢測
        2.3.4 RT-qPCR分析
    2.4 討論
第3章 CRISPR/Cas9 技術(shù)平臺(tái)的構(gòu)建
    3.1 材料與方法
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌株和質(zhì)粒
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.4 培養(yǎng)基和培養(yǎng)液配方
        3.1.5 實(shí)驗(yàn)耗材和儀器
        3.1.6 PCR擴(kuò)增所用的引物列表
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 構(gòu)建載體
        3.2.2 載體的轉(zhuǎn)化
        3.2.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)轉(zhuǎn)化
        3.2.4 發(fā)根農(nóng)桿菌K599 誘導(dǎo)毛狀根
    3.3 結(jié)果與分析:
        3.3.1 靶點(diǎn)的選擇
        3.3.2 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的鑒定
        3.3.3 發(fā)根農(nóng)桿菌誘導(dǎo)“天隆1 號(hào)”大豆發(fā)狀根的檢測
        3.3.4 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的大豆子葉節(jié)轉(zhuǎn)化
        3.3.5 小結(jié)與討論
第4章 結(jié)論
第5章 創(chuàng)新點(diǎn)和展望
    5.1 本研究的創(chuàng)新點(diǎn)
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄1
附錄2
附錄3
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]60Co-γ射線誘變大豆“桂夏7號(hào)”突變體篩選[J]. 孫孟園,白云,李振宇,黎艷,蔣亨珂,孫歆,余靚,劉春燕,杜俊波,楊文鈺.  四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(06)
[2]甲基磺酸乙酯誘變煙草的SSR多態(tài)性分析[J]. 薄韶云,劉文濤,張漸隆,溫亮,曹鵬云,吳新儒,晁江濤,李志遠(yuǎn),王大偉,劉貫山.  分子植物育種. 2019(17)
[3]擬南芥白化突變體反射光譜及色素含量研究[J]. 郭彥,張文會(huì).  安徽農(nóng)學(xué)通報(bào). 2018(14)
[4]菜豆品種黃金勾伽瑪射線突變體庫的建立及突變表型觀察[J]. 郭寧,鄭佳佳,胡博,顧詠梅,郭若琳,吳紅艷,張文靜,姚文靜,翟紅,夏正俊.  土壤與作物. 2018(02)
[5]60Co誘變大豆滯綠突變體M6變異分析[J]. 溫宏偉,王鵬,李貴全.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2018(04)
[6]農(nóng)桿菌T-DNA傳遞相關(guān)基因研究進(jìn)展[J]. 王根平,張婷,師志剛,程汝宏.  分子植物育種. 2017(05)
[7]Ri質(zhì)粒T-DNA對6年生轉(zhuǎn)基因三倍體毛白楊生長和生理性狀的影響[J]. 王瑞雪,邱彤,劉紅梅,張曉軍,梁海永,王進(jìn)茂.  核農(nóng)學(xué)報(bào). 2017(06)
[8]龍須菜果孢子的X射線誘變及優(yōu)勢突變體的篩選[J]. 魏惠惠,隋正紅,王津果,杜青偉,商二磊,米萍,闕州.  中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2016(09)
[9]甜瓜T-DNA插入突變體的構(gòu)建[J]. 許榮華,姜陸,寧雪飛,李冠.  新疆農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(06)
[10]大豆華夏3號(hào)突變體庫構(gòu)建及SSR分子標(biāo)記[J]. 黃益安,鄧小娟,萬海波,王朋,方小龍,張杰,楊存義.  中國油料作物學(xué)報(bào). 2016(02)

博士論文
[1]甘藍(lán)型油菜EMS突變體庫的構(gòu)建及TILLING、EcoTILLING技術(shù)的應(yīng)用研究[D]. 汪念.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009

碩士論文
[1]二穗短柄草（Brachypodium distachyon）T-DNA插入突變體庫構(gòu)建[D]. 李慧玲.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]粳稻“日本晴”突變體庫的創(chuàng)建和部分重要性狀的遺傳分析[D]. 阮伯勝.浙江大學(xué) 2008
[3]～（60）Co-γ射線對厚皮甜瓜的生物學(xué)效應(yīng)研究[D]. 劉芹.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3653363