MicroRNAs（miRNAs）是一類非編碼的長約21-25 nt的單鏈小RNA分子,普遍存在于各種生物中。miRNA可通過與其靶基因mRNA的特異性結(jié)合,引起靶基因mRNA的降解或抑制蛋白的合成,從而參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的生命活動進(jìn)程。miRNA功能研究通過對miRNA過表達(dá)或抑制,分析miRNA及其靶基因的表達(dá)和功能。查詢miRNA數(shù)據(jù)庫——miRBase得知,家蠶（Bombyx mori,Bmo）中已有大量的miRNAs序列被發(fā)現(xiàn)。序列同源性比對發(fā)現(xiàn)在其他物種中也存在大量miRNAs,其數(shù)量遠(yuǎn)未達(dá)到飽和。目前,已有大部分的miRNA通過生物信息學(xué)方法被發(fā)現(xiàn),但對家蠶中miRNAs的功能研究相對較少。細(xì)胞自噬對生物體生長、發(fā)育、疾病發(fā)生與控制等都有著重要意義,但是在高等動物研究中還存在許多未知的領(lǐng)域。家蠶作為鱗翅目昆蟲的模式生物與哺乳動物基因組相比,家蠶基因組相對簡單且個體較大,基因組全長為450 M左右,共有28對染色體,是研究昆蟲變態(tài)發(fā)育的理想材料本研究以與家蠶自噬相關(guān)Bmo-miR-34為研究對象,根據(jù)生物信息學(xué)方法預(yù)測出該miRNA潛在的靶基因。首先通過雙熒光素酶報告基因載體檢測... 

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 miRNA的研究
        1.1.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 家蠶miRNA的研究進(jìn)展
        1.1.3 miRNA的合成
        1.1.4 miRNA的作用機制
    1.2 自噬的研究
        1.2.1 細(xì)胞自噬概述
        1.2.2 細(xì)胞自噬調(diào)控機制
        1.2.3 家蠶細(xì)胞自噬研究現(xiàn)狀
    1.3 研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
    2.2 主要實驗儀器
    2.3 主要實驗試劑及溶液配制
        2.3.1 主要實驗試劑
        2.3.2 常用溶液配制
    2.4 主要實驗方法
        2.4.1 載體構(gòu)建方法
        2.4.2 雙熒光素酶報告基因體系檢測方法
        2.4.3 細(xì)胞瞬時過表達(dá)熒光載體的檢測
        2.4.4 個體注射過表達(dá)或抑制miRNA
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 雙熒光素酶報告基因體系檢測
        3.1.1 Atg1/pMD19-T載體構(gòu)建
        3.1.2 Atg1/psiCHECK2載體構(gòu)建
        3.1.3 雙熒光素酶活性檢測
    3.2 細(xì)胞瞬時過表達(dá)熒光載體的檢測
        3.2.1 20E誘導(dǎo)自噬發(fā)生
        3.2.2 Bmo-miR-34轉(zhuǎn)染BmN細(xì)胞時間優(yōu)化
        3.2.3 Bmo-miR-34轉(zhuǎn)染BmN細(xì)胞實驗
        3.2.4 ATG8在BmN細(xì)胞中的表達(dá)
    3.3 個體實驗
第四章 結(jié)論與討論
    4.1 結(jié)論
        4.1.1 Bmo-miR-34通過與靶基因的互作抑制報告基因熒光素酶活性
        4.1.2 Bmo-miR-34影響20E誘導(dǎo)的BmN細(xì)胞自噬的發(fā)生
        4.1.3 Bmo-miR-34的過表達(dá)或抑制影響脂肪體自噬發(fā)生
    4.2 討論
    4.3 研究展望
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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