MicroRNAs（miRNAs）是一類非編碼的長約21-25 nt的單鏈小RNA分子,普遍存在于各種生物中。miRNA可通過與其靶基因mRNA的特異性結(jié)合,引起靶基因mRNA的降解或抑制蛋白的合成,從而參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的生命活動(dòng)進(jìn)程。miRNA功能研究通過對(duì)miRNA過表達(dá)或抑制,分析miRNA及其靶基因的表達(dá)和功能。查詢miRNA數(shù)據(jù)庫——miRBase得知,家蠶（Bombyx mori,Bmo）中已有大量的miRNAs序列被發(fā)現(xiàn)。序列同源性比對(duì)發(fā)現(xiàn)在其他物種中也存在大量miRNAs,其數(shù)量遠(yuǎn)未達(dá)到飽和。目前,已有大部分的miRNA通過生物信息學(xué)方法被發(fā)現(xiàn),但對(duì)家蠶中miRNAs的功能研究相對(duì)較少。細(xì)胞自噬對(duì)生物體生長、發(fā)育、疾病發(fā)生與控制等都有著重要意義,但是在高等動(dòng)物研究中還存在許多未知的領(lǐng)域。家蠶作為鱗翅目昆蟲的模式生物與哺乳動(dòng)物基因組相比,家蠶基因組相對(duì)簡單且個(gè)體較大,基因組全長為450 M左右,共有28對(duì)染色體,是研究昆蟲變態(tài)發(fā)育的理想材料本研究以與家蠶自噬相關(guān)Bmo-miR-34為研究對(duì)象,根據(jù)生物信息學(xué)方法預(yù)測出該miRNA潛在的靶基因。首先通過雙熒光素酶報(bào)告基因載體檢測... 

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 miRNA的研究
        1.1.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 家蠶miRNA的研究進(jìn)展
        1.1.3 miRNA的合成
        1.1.4 miRNA的作用機(jī)制
    1.2 自噬的研究
        1.2.1 細(xì)胞自噬概述
        1.2.2 細(xì)胞自噬調(diào)控機(jī)制
        1.2.3 家蠶細(xì)胞自噬研究現(xiàn)狀
    1.3 研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑及溶液配制
        2.3.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.3.2 常用溶液配制
    2.4 主要實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 載體構(gòu)建方法
        2.4.2 雙熒光素酶報(bào)告基因體系檢測方法
        2.4.3 細(xì)胞瞬時(shí)過表達(dá)熒光載體的檢測
        2.4.4 個(gè)體注射過表達(dá)或抑制miRNA
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 雙熒光素酶報(bào)告基因體系檢測
        3.1.1 Atg1/pMD19-T載體構(gòu)建
        3.1.2 Atg1/psiCHECK2載體構(gòu)建
        3.1.3 雙熒光素酶活性檢測
    3.2 細(xì)胞瞬時(shí)過表達(dá)熒光載體的檢測
        3.2.1 20E誘導(dǎo)自噬發(fā)生
        3.2.2 Bmo-miR-34轉(zhuǎn)染BmN細(xì)胞時(shí)間優(yōu)化
        3.2.3 Bmo-miR-34轉(zhuǎn)染BmN細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 ATG8在BmN細(xì)胞中的表達(dá)
    3.3 個(gè)體實(shí)驗(yàn)
第四章 結(jié)論與討論
    4.1 結(jié)論
        4.1.1 Bmo-miR-34通過與靶基因的互作抑制報(bào)告基因熒光素酶活性
        4.1.2 Bmo-miR-34影響20E誘導(dǎo)的BmN細(xì)胞自噬的發(fā)生
        4.1.3 Bmo-miR-34的過表達(dá)或抑制影響脂肪體自噬發(fā)生
    4.2 討論
    4.3 研究展望
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]家蠶miR-301對(duì)化學(xué)感受蛋白基因csp9表達(dá)的調(diào)控[J]. 楊娟娟,王遠(yuǎn)卓,魏博帆,邢秋婷,闞云超,喬惠麗.  昆蟲學(xué)報(bào). 2018(10)
[2]HIPK3基因3’UTR雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建及其與靶向miR-146的驗(yàn)證[J]. 楊開雯,強(qiáng)鄭,靳文雨,劉昉.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2018(04)
[3]FBXO47 3’-UTR雙熒光素酶報(bào)告載體構(gòu)建及與miR-33b-5p靶向驗(yàn)證[J]. 楊曉燕,謝聃,趙倩,尹華麗,雷小勇,甘潤良.  生物技術(shù). 2018(01)
[4]靶向調(diào)控飛蝗表皮代謝相關(guān)基因的miRNA的鑒定與分析[J]. 王艷麗,楊美玲,馬恩波,張建珍.  昆蟲學(xué)報(bào). 2017(03)
[5]雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)鑒定has-miR-577和has-miR-583對(duì)FGF-21基因的靶向調(diào)控[J]. 張玫,何訸,宋昊嵐,周君,黃亨建,應(yīng)斌武,安振梅.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2016(06)
[6]Nfic基因3′UTR雙熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建及其與miR-20a靶向關(guān)系的驗(yàn)證[J]. 王珊,李曉霞,周杰,王寶利.  天津醫(yī)藥. 2016(09)
[7]家蠶miR-0001和miR-0015體外下調(diào)BmFib-L基因的表達(dá)（英文）[J]. Chen CHEN,Yang-yang FAN,Xin WANG,Fei SONG,Tao JIANG,Ping QIAN,Shun-ming TANG,Xing-jia SHEN.  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine & Biotechnology）. 2016(02)
[8]家蠶非編碼RNA在神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)分析[J]. 王立方,喬惠麗,吳博,張丹,闞云超,李丹丹.  昆蟲學(xué)報(bào). 2015(08)
[9]家蠶Bmo-miR-2739對(duì)絲素重鏈基因Fib-H表達(dá)的調(diào)控作用[J]. 宋菲,王欣,錢平,唐順明,趙巧玲,郭錫杰,沈興家.  蠶業(yè)科學(xué). 2014(03)
[10]蛻皮激素與其受體EcR-USP的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制[J]. 李康,李勝,曹陽.  昆蟲學(xué)報(bào). 2011(08)



本文編號(hào)：3650394