本研究旨在將建立的馬（Equuscaballus）骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞。通過(guò)原代細(xì)胞培養(yǎng)獲取馬的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,并對(duì)第3代（P3）純化細(xì)胞進(jìn)行干細(xì)胞特性鑒定,之后誘導(dǎo)其向不同細(xì)胞分化并對(duì)誘導(dǎo)分化的細(xì)胞進(jìn)行染色和特異性基因表達(dá)的鑒定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,獲得的馬骨髓細(xì)胞表達(dá)了干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子和間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記物,確定獲得的細(xì)胞為馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。P3代細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)后由長(zhǎng)梭形轉(zhuǎn)變?yōu)?骨結(jié)節(jié)"形態(tài)的成骨細(xì)胞和"鋪路石"形態(tài)的軟骨細(xì)胞。茜素紅將誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞團(tuán)染成紅色,并隨著時(shí)間的遞增紅色"骨結(jié)節(jié)"逐步增大;阿爾新藍(lán)則將蛋白聚糖和透明質(zhì)酸等含量豐富的誘導(dǎo)細(xì)胞染為藍(lán)色,并且隨著誘導(dǎo)天數(shù)的增加被染成藍(lán)色的軟骨細(xì)胞逐漸增多,而對(duì)照組細(xì)胞未見著色。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),成骨細(xì)胞中Col和ALPL基因的表達(dá)量隨誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)發(fā)生明顯變化;普通PCR結(jié)果顯示,在誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞中擴(kuò)增獲得了collagenⅡ、aggrecan和Sox9軟骨特異基因,而對(duì)照組細(xì)胞不表達(dá)特異基因。綜上所述,本實(shí)驗(yàn)建立了馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞并成功將其誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞,為骨組織缺損修復(fù)和軟骨... 

【文章來(lái)源】：動(dòng)物學(xué)雜志. 2020,55(03)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)
    1.3 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子及表面標(biāo)志物的鑒定
    1.4 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨和軟骨細(xì)胞的誘導(dǎo)分化
    1.5 染色鑒定成骨和軟骨細(xì)胞
    1.6 定量PCR檢測(cè)
2 結(jié)果與分析
    2.1 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞系的建立
        2.1.1 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離和純化
        2.1.2 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子基因的檢測(cè)
    2.2 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨的誘導(dǎo)分化及鑒定
        2.2.1 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨的誘導(dǎo)分化
        2.2.2馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)成骨的染色鑒定
        2.2.3 成骨特異基因表達(dá)的鑒定
    2.3 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化及鑒定
        2.3.1 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞的誘導(dǎo)分化
        2.3.2 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨誘導(dǎo)分化的染色鑒定
        2.3.3 馬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)分化的鑒定
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]兩種體外培養(yǎng)體系對(duì)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)、增殖和成骨分化的影響比較[J]. 徐楊,林飛躍,尹曉明.  福建醫(yī)藥雜志. 2019(06)
[2]牛骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)體系的優(yōu)化[J]. 趙欣欣,姜禹,安星蘭,翟巖輝,張勝,唐博,李子義,張學(xué)明.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(05)
[3]大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)及成骨成脂分化能力染色鑒定[J]. 韓振忠,魯艷芹,王延宙,任秀智,滕元偉,張宇昂,韓金祥.  罕少疾病雜志. 2016(02)



本文編號(hào)：3644447