Gateway技術(shù)是一種非常便捷的載體構(gòu)建方法,但目前構(gòu)建入門克隆的方法成本較高,且存在一定的局限性.利用限制酶EcoRⅠ對(duì)pCR8-AtS5H入門克隆進(jìn)行單酶切,獲得入門載體pCR8片段,然后利用不依賴序列和連接的一步克隆方法（one-step sequence-and ligation-independent cloning,One-SLIC）將純化后水稻異分支酸合成酶基因的啟動(dòng)子（ICS1pro）片段連接至pCR8入門載體,并通過菌落PCR和測序方法鑒定得到陽性入門克隆,最后通過LR重組反應(yīng)將ICS1pro片段轉(zhuǎn)移至Gateway目的載體pMDC163上.這種利用One-SLIC法快速高效構(gòu)建入門克隆的方法操作簡便,成功率高且成本低,是一種具有廣泛應(yīng)用前景的Gateway入門載體構(gòu)建方法. 

【文章來源】：浙江師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,43(01)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材 料
    1.2 方 法
        1.2.1 引物設(shè)計(jì)
        1.2.2 ICS1pro片段的擴(kuò)增與純化
        1.2.3 pCR8片段的獲得
        1.2.4 pCR8-ICS1pro質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.5 pCR8-ICS1pro質(zhì)粒的菌落PCR驗(yàn)證和測序
        1.2.6 LR重組反應(yīng)
        1.2.7 pMDC163-ICS1pro質(zhì)粒的菌落PCR驗(yàn)證和測序
2 結(jié)果與討論
    2.1 ICS1pro片段擴(kuò)增
    2.2 pCR8片段的獲得
    2.3 pCR8-ICS1pro入門克隆的構(gòu)建
    2.4 pMDC163-ICS1pro目標(biāo)載體的構(gòu)建
3 討 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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