Gateway技術(shù)是一種非常便捷的載體構(gòu)建方法,但目前構(gòu)建入門克隆的方法成本較高,且存在一定的局限性.利用限制酶EcoRⅠ對pCR8-AtS5H入門克隆進(jìn)行單酶切,獲得入門載體pCR8片段,然后利用不依賴序列和連接的一步克隆方法（one-step sequence-and ligation-independent cloning,One-SLIC）將純化后水稻異分支酸合成酶基因的啟動(dòng)子（ICS1pro）片段連接至pCR8入門載體,并通過菌落PCR和測序方法鑒定得到陽性入門克隆,最后通過LR重組反應(yīng)將ICS1pro片段轉(zhuǎn)移至Gateway目的載體pMDC163上.這種利用One-SLIC法快速高效構(gòu)建入門克隆的方法操作簡便,成功率高且成本低,是一種具有廣泛應(yīng)用前景的Gateway入門載體構(gòu)建方法. 

【文章來源】：浙江師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2020,43(01)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材 料
    1.2 方 法
        1.2.1 引物設(shè)計(jì)
        1.2.2 ICS1pro片段的擴(kuò)增與純化
        1.2.3 pCR8片段的獲得
        1.2.4 pCR8-ICS1pro質(zhì)粒的構(gòu)建
        1.2.5 pCR8-ICS1pro質(zhì)粒的菌落PCR驗(yàn)證和測序
        1.2.6 LR重組反應(yīng)
        1.2.7 pMDC163-ICS1pro質(zhì)粒的菌落PCR驗(yàn)證和測序
2 結(jié)果與討論
    2.1 ICS1pro片段擴(kuò)增
    2.2 pCR8片段的獲得
    2.3 pCR8-ICS1pro入門克隆的構(gòu)建
    2.4 pMDC163-ICS1pro目標(biāo)載體的構(gòu)建
3 討 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]擬南芥谷氧還蛋白GRXC9負(fù)調(diào)控葉片大小[J]. 黃淦,王瀟,金學(xué)鋒,王小菁,王亞琴.  植物學(xué)報(bào). 2017(05)
[2]重組陽離子抗腫瘤肽AIK的原核表達(dá)、純化及活性測定[J]. 范芳芳,孫慧瑩,徐暉,劉佳瑋,張海員,李亦蘭,寧雪蓮,孫悅,白靜,傅松濱,周春水.  生物工程學(xué)報(bào). 2015(12)
[3]基于Gateway技術(shù)的低成本植物雙分子熒光互補(bǔ)分析系統(tǒng)[J]. 周潔,王栩鳴,陳斌,陳娟,楊勇,余初浪,嚴(yán)成其,陳劍平.  浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(05)
[4]用于通路（Gateway）克隆技術(shù)的植物表達(dá)載體研究進(jìn)展[J]. 肖素勤,孫振,軒秀霞,陳麗梅.  植物科學(xué)學(xué)報(bào). 2012(05)
[5]利用 TA 克隆的方法簡便構(gòu)建入門克隆[J]. 殷憲倫,王春濤,孔祥翔,楊永平,胡向陽.  植物分類與資源學(xué)報(bào). 2012(04)
[6]使用與Gateway技術(shù)兼容的T載體獲得入門克隆[J]. 陳其軍,安瑞,周海夢,陳珈,王學(xué)臣.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2004(10)
[7]一種PCR快速鑒定重組體DNA陽性克隆及插入方向的方法[J]. 廖世奇,張春梅,張雪力,孫雨葳,王黎,王曉輝.  科學(xué)技術(shù)與工程. 2004(02)



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