抗生素不科學(xué)地使用使得細(xì)菌耐藥性和藥物殘留等問題日益突出,嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展和人類食品安全,研發(fā)安全有效的抗生素的替代品已刻不容緩�？莶菅堪麠U菌廣泛存在水體、土壤及動(dòng)物的胃腸道中,具有促進(jìn)動(dòng)物營養(yǎng)成分消化吸收、抑菌、調(diào)控腸道菌群及提高動(dòng)物免疫力等作用,且易于分離和培養(yǎng),已成為飼添抗生素的最佳替代品之一。因此,本研究旨在從豬糞中篩選出優(yōu)勢的枯草芽胞桿菌,并將此株優(yōu)勢菌株應(yīng)用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn),探討其益生作用,為枯草芽胞桿菌制劑的開發(fā)提供技術(shù)支持。主要研究結(jié)果如下:1.枯草芽胞桿菌的篩選:從100份豬糞樣品中通過熱處理的方法得到50株芽胞桿菌,通過顯微鏡鏡檢、生理生化試驗(yàn)、PCR鑒定及16S r RNA序列分析,鑒定出25株枯草芽胞桿菌,分別命名為BS-1～BS-25。通過產(chǎn)酶試驗(yàn)及抑菌試驗(yàn)篩選枯草芽胞桿菌優(yōu)勢菌株,產(chǎn)酶試驗(yàn)結(jié)果表明:除菌株BS-12、BS-13、BS-14外,其它菌株均能分泌蛋白酶;除菌株BS-11和BS-18外,其它菌株均能分泌纖維素酶;除菌株BS-10外,其它菌株均能分泌淀粉酶;綜上,菌株BS-19綜合產(chǎn)酶能力最強(qiáng)。抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明,菌株BS-3、BS-15、BS-19對... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省211工程院校教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

．1益生菌對腸道免疫系統(tǒng)作用（CummingsJH2004）

豬源枯草芽胞桿菌的篩選與初步應(yīng)用研究23（a）（b）（c）圖4-1芽胞桿菌的菌落形態(tài)（a）、革蘭氏染色（b）、芽胞染色（c）Fig.4-1Colonymorphology(a),Gramstaining(b),Sporestaining（c）ofBacillusspp.4.2枯草芽胞桿菌生理生化檢測根據(jù)枯草芽胞桿菌分屬檢索表，將鑒定結(jié)果與《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》上關(guān)于枯草芽胞桿菌的描述相對照（如下表4-1所示），結(jié)果與其一致的有25株，初步鑒定為枯草芽胞桿菌，分別命名為BS-1~BS-25。表4-1枯草芽胞桿菌生理生化檢測結(jié)果Table4-1PhysiologicalandbiochemicalcharacteristicsofBSstrain項(xiàng)目結(jié)果項(xiàng)目結(jié)果蛋白胨水-阿拉伯糖-尿素+木糖-枸緣酸鹽-甘露醇-苯丙氨酸-精氨酸脫羧酶+淀粉-明膠液化+硝酸鹽還原+硫化氫-葡磷胨水-棉子糖-注：“-”表示陰性；“+”表示陽性。Note:"-"meansnegative;"+"meanspositive.4.3枯草芽胞桿菌的分子生物學(xué)鑒定用特異性引物rpoA基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增長度約為250bp，如圖4-2所示，與預(yù)期片段大小一致；用16SrRNA通用引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，大小約為1500bp如圖4-3所示，符合枯草芽胞桿菌的預(yù)期擴(kuò)增片段長度。25株疑似菌株經(jīng)克壟

華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士研究生學(xué)位（畢業(yè)）論文測序和序列分析，將測序結(jié)果在NCBI進(jìn)行Blast比對，與GeneBank數(shù)據(jù)庫中枯草芽胞桿菌同源性高達(dá)99.99%，并從NCBI上下載有一定同源關(guān)系的菌株序列，用MAGE6.0軟件采用鄰接法構(gòu)建進(jìn)化樹如圖4-4所示。綜上可知，25株疑似菌株為枯草芽胞桿菌。具體測序后的序列以枯草芽胞桿菌BS-19為例，見附表A。圖4-2枯草芽胞桿菌特異性引物的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖Fig.4-2PCRAmplifiedProductswithSpecificPrimersofBacillussubtilis1~25:BS-1~BS-25特異性引物擴(kuò)增片段；M:DL2000DNAMarker圖4-3枯草芽胞桿菌通用引物的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖Fig.4-3PCRAmplifiedProductswithUniversalPrimerofBacillussubtilis1~3:BS-1~BS-3通用引物擴(kuò)增片段；M:DL2000DNAMarker

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]枯草芽孢桿菌微生態(tài)制劑發(fā)酵研究進(jìn)展[J]. 杜曉雨,趙愷,趙志敏,趙吉.  微生物學(xué)通報(bào). 2020(03)
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[4]植物乳桿菌WLPL01艾草發(fā)酵液干預(yù)鼠傷寒沙門氏菌感染小鼠的作用[J]. 詹暉,田林林,鐘常城,何瑤,王謙慧,楊琴,魏華,陶雪瑩.  南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(理科版). 2019(04)
[5]枯草芽孢桿菌主要作用機(jī)制與應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 李怡潔,楊佐忠.  四川林業(yè)科技. 2019(04)
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[8]布拉酵母菌對輪狀病毒性胃腸炎患兒臨床癥狀及血清IL-10、CD8+的影響[J]. 王寬鋒,屈暉,鐘紅平,王翠翠,任華.  貴州醫(yī)藥. 2019(06)
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碩士論文
[1]飼糧中添加枯草芽孢桿菌和糞腸球菌對水貂生產(chǎn)性能、消化代謝及免疫功能的影響[D]. 乜豪.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2018
[2]枯草芽孢桿菌J-4菌株對雛雞免疫功能的影響[D]. 楊曦.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



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