對重組人溶菌酶真核表達(dá)載體的構(gòu)建篩選、表達(dá)與活性鑒定,經(jīng)過雙酶切和測序鑒定表明,重組載體正確。電轉(zhuǎn)化畢赤酵母GWDL菌株,通過G418抗性平板篩選得到高表達(dá)高效價菌株,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá),檢測蛋白含量,體外抑菌檢測,表達(dá)產(chǎn)物15 ku和預(yù)期結(jié)果一致,篩選得到效價為1 907 U/mL,編號為SMD1168-pPIC9k-HLZ的高效價菌株;采用重組人溶菌酶制劑,檢測樣品GWDL對5種菌的最小抑菌濃度（MIC）,藤黃微球菌的最小抑菌濃度較好,表明重組人溶菌酶在畢赤酵母中成功表達(dá),活性較為穩(wěn)定。 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,48(04)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料與試劑
    1.2 主要儀器設(shè)備
    1.3 引物設(shè)計與合成
    1.4 人外周血淋巴細(xì)胞總RNA的提取及cDNA模板的克隆
    1.5 人溶菌酶基因序列的PCR擴增
    1.6 人溶菌酶真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
    1.7 重組質(zhì)粒對畢赤酵母SMD1168的轉(zhuǎn)化及篩選
    1.8 人溶菌酶的誘導(dǎo)表達(dá)及檢測
    1.9 重組酵母表達(dá)人溶菌酶抑菌活性測定
        1.9.1 重組人溶菌酶抑菌效價測定。
        1.9.2 重組人溶菌酶制劑對體外常見致病菌的最小抑菌濃度測定。
2 結(jié)果與分析
    2.1 人溶菌酶基因序列的PCR擴增
    2.2 人溶菌酶真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
    2.3 重組質(zhì)粒對畢赤酵母SMD1168的轉(zhuǎn)化及篩選
    2.4 表達(dá)蛋白的電泳檢測
    2.5 抑菌活性檢測
    2.6 重組人溶菌酶制劑對體外常見致病菌的最小抑菌濃度測定
3 結(jié)論與討論


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]基于人工智能和代謝調(diào)控的典型好氧發(fā)酵過程在線控制和故障診斷[D]. 丁健.江南大學(xué) 2014

碩士論文
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本文編號：3627954