為明確柯巴基焦磷酸合酶基因（CPS2）的功能和調(diào)控機制,利用CRISPR/Cas9技術(shù)對高香氣烤煙品系8306中的CPS2基因進行定向編輯,得到了7株靶位點單堿基A/T/C插入的轉(zhuǎn)化植株。利用q-PCR技術(shù)分析轉(zhuǎn)化植株二萜類關(guān)鍵基因的表達,并利用GC/MS分析葉面分泌物成分及香葉基香葉基焦磷酸（GGPP）含量（質(zhì)量分數(shù)）。結(jié)果表明:（1）T0代轉(zhuǎn)化植株CPS2及ABS表達量顯著降低,冷杉醇和賴百當烯二醇含量也顯著降低。（2）DXR表達量均顯著升高,GGPP含量也大幅提高。（3）CYC-1和CYP71D16表達量差異較大,西柏三烯二醇出現(xiàn)小幅降低。（4）T0代轉(zhuǎn)化植株的株高、莖圍、葉間距、最大葉長、最大葉寬均增加。因此,敲除CPS2能夠抑制賴百當類化合物合成,有助于上游途徑中萜類合成前體GGPP的積累,可能抑制西柏三烯二醇積累,同時使植株表型性狀發(fā)生變化。 

【文章來源】：煙草科技. 2020,53(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 煙草材料及載體試劑盒
    1.2 CRISPR/Cas9載體構(gòu)建
    1.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化
    1.4 轉(zhuǎn)化植株目標基因靶位點序列突變檢測
    1.5 轉(zhuǎn)化植株二萜類關(guān)鍵基因相對表達量測定
    1.6 轉(zhuǎn)化植株葉面分泌物及GGPP含量測定
    1.7 農(nóng)藝性狀調(diào)查
    1.8 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
    2.1 gRNA靶位點選擇及表達載體構(gòu)建
    2.2 轉(zhuǎn)化植株靶位點序列突變的差異分析
    2.3 轉(zhuǎn)化植株二萜類物質(zhì)關(guān)鍵基因的差異表達分析
    2.4 轉(zhuǎn)化植株葉面分泌物及GGPP含量的差異分析
    2.5 轉(zhuǎn)化植株農(nóng)藝性狀指標分析
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3627948