發(fā)布時(shí)間：2022-02-15 09:27

　　目的:本研究用腺病毒或慢病毒感染人脂肪干細(xì)胞,通過細(xì)胞培養(yǎng)、Real-timePCR、免疫熒光和Western blotting等實(shí)驗(yàn)方法證明miR-150通過靶向調(diào)控Notch3/FAK/ERK1/2負(fù)向調(diào)控人脂肪干細(xì)胞（hADSCs）的成骨分化。為骨損傷骨缺損等治療提供新的思路。研究方法:1.體外條件下,培養(yǎng)人脂肪干細(xì)胞,將三組細(xì)胞:N組,GFP組,miR-150組于六孔板中培養(yǎng)。用過表達(dá)miR-150的腺病毒感染hADSCs。Realtime-PCR檢測(cè)miR-150的表達(dá);Western blotting檢測(cè)Notch3的表達(dá)水平。Western blotting檢測(cè)FAK、pFAK、ERK1/2、pERK1/2、ROHA等成骨信號(hào)通路相關(guān)蛋白。用免疫熒光檢測(cè)FAK、pFAK、ERK1/2、pERK1/2、RhoA、F-actin的蛋白表達(dá)。CCK8檢測(cè)miR-150對(duì)hADSCs增殖的影響。2.將四組細(xì)胞:GFP組,Notch3-siR1組,Notch3-siR2,Notch3-siR3組于六孔板中培養(yǎng)。用敲除Notch3的慢病毒感染hADSCs。Western blotti... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

過表達(dá)miR-150的hADSCs的構(gòu)建標(biāo)尺示100μm2A2B2C

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文16活性低于N組和GFP組。ALP染色結(jié)果所示，同N組和GFP組比較，miR-150組ALP染色強(qiáng)度減弱。（圖5、6、7）5ANN+OMGFP+OMmiR-150+OM0.00.51.01.52.02.5RelativelevelsofRUNX-2(normalizedtoGAPDH)*#5B圖5hADSCs成骨誘導(dǎo)7天RUNX-2表達(dá)A.RUNX-2在hADSCs中的表達(dá)情況；B.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，與N組相比，*P<0.05;統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，與GFP+OM組相比，#P<0.05NN+OMGFP+OMmiR-150+OM0123**#ALPactivity圖6hADSCs成骨誘導(dǎo)7天ALP表達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，與N組相比，**P<0.01;統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，與GFP+OM組相比，#P<0.05圖7hADSCs成骨誘導(dǎo)7天ALP染色，標(biāo)尺示50μmNGFPmiR-1507A7B7C7DOM36KD56KDGAPDHRUNX-2－＋＋＋50μm

中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文20統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果分析，與N組相比，***P<0.001;統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果分析，對(duì)比著control+OM組，##P<0.01圖12hADSCs成骨誘導(dǎo)7天ALP染色，標(biāo)尺示50μmA.N組ALP染色結(jié)果；B.N+OM組ALP染色結(jié)果；C.control+OM組ALP染色結(jié)果;D.miR-150inhibitor+OM組ALP染色結(jié)果3.3.2抑制miR-150表達(dá)后檢測(cè)相關(guān)蛋白在hADSCs的表達(dá)檢測(cè)Notch3、pFAK、FAK、pERK1/2、ERK、RhoA在hADSCs中的表達(dá)，結(jié)果顯示，miR-150inhibitor組hADSCs的Notch3、pFAK、pERK1/2、RhoA蛋白的表達(dá)量明顯高于N組和control組。FAK、ERK與對(duì)照組相比無差別。（圖13）13A12A12B12C12D50μmNcontrolmiR-150inhibitorNotch3pFAKFAKERK1/2pERK1/2RhoAGAPDH280KD125KD125KD44KD44KD21KD36KD

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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