目的探討細(xì)胞液泡分選蛋白4B（VPS4B）對人牙髓干細(xì)胞（h DPSCs）成牙本質(zhì)分化及Notch通路的影響。方法 h DPSCs分正常組、礦化組、陰性對照組、VPS4B-siRNA組,除正常組（正常培養(yǎng),不做任何處理）外,其余各組添加礦化液（0.785 g/L地塞米松、0.05 g/L維生素、2.16 g/Lβ-甘油磷酸鈉）,同時陰性對照組和VPS4BsiRNA組均用脂質(zhì)體Lipofectamine 2000分別和陰性對照siRNA、VPS4B-siRNA共轉(zhuǎn)染。CCK8檢測細(xì)胞增殖情況;蛋白免疫印跡檢測細(xì)胞中VPS4B、Notch受體釋放其胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域（NICD）、hairy相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1（Hey1）蛋白水平;茜素紅染色觀察細(xì)胞礦化情況;鈣濃度檢測試劑盒檢測細(xì)胞鈣濃度;實(shí)時熒光定量PCR檢測細(xì)胞Runx2、骨橋蛋白（OPN）、牙本質(zhì)涎磷蛋白（DSPP） mRNA水平。結(jié)果正常組茜素紅染色較淺,面積較小;礦化組、陰性對照組染色較深,且面積較大; VPS4B-siRNA組染色顏色有所減輕,面積減少。與正常組相比,礦化組、陰性對照組OD450水平,NICD、Hey1蛋白水平降低（P<... 

【文章來源】：中國比較醫(yī)學(xué)雜志. 2020,30(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

4組細(xì)胞中VPS4B蛋白表達(dá)情況

與正常組相比，礦化組、陰性對照組鈣濃度升高(P<0.05);分別與礦化組、陰性對照組相比，VPS4B-siRNA組鈣濃度降低(P<0.05)。見表4。2.5 干擾VPS4B對h DPSCs中Runx2、OPN、DSPP mRNA水平的影響

Runx2具有多個結(jié)合位點(diǎn)，可以結(jié)合在靶基因的啟動子上從而調(diào)控眾多成骨相關(guān)的靶基因，如骨鈣素、OPN等，影響細(xì)胞分化;增強(qiáng)Runx2表達(dá)可促進(jìn)h DPSCs分化為成牙本質(zhì)細(xì)胞[11-12]。OPN可結(jié)合羥基磷灰石晶體從而參與鈣離子信號傳導(dǎo)過程，在初期礦化中起重要作用;DSPP作為牙本質(zhì)特異性蛋白，其水平反映h DPSCs成牙本質(zhì)分化水平[13-14]。本研究發(fā)現(xiàn)，與正常組相比，礦化組Runx2、OPN、DSPP mRNA水平升高，提示Runx2促進(jìn)參與礦化過程中的OPN和形成牙本質(zhì)的相關(guān)基因水平升高，促進(jìn)h DPSCs牙本質(zhì)分化。與礦化組相比，VPS4B-siRNA組Runx2、OPN、DSPP mRNA水平降低，提示干擾VPS4B后Runx2水平降低，對OPN的促進(jìn)作用減弱，導(dǎo)致牙本質(zhì)分化相關(guān)基因如DSPP等水平降低，h DPSCs牙本質(zhì)分化能力減弱。圖4 4組細(xì)胞中NICD、Hey1蛋白表達(dá)情況

【參考文獻(xiàn)】：
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