豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）是引起豬圓環(huán)病毒病（Porcine circovirus diseases,PCVDs）的病原,主要侵害感染豬的免疫細(xì)胞,導(dǎo)致嚴(yán)重的免疫抑制,使感染豬對其他病原的易感性增高,引起多種疾病的發(fā)生,嚴(yán)重危害生豬健康養(yǎng)殖和豬病防控。PCV2是目前發(fā)現(xiàn)的感染哺乳動物最小的DNA病毒,基因組由1766～1768個核苷酸組成,對病毒致病機(jī)理的闡明是防控疾病的基礎(chǔ),明確編碼蛋白在病毒致病中的作用是揭示其致病機(jī)理的重要方面。PCV2基因組結(jié)構(gòu)簡單,生物信息學(xué)軟件分析發(fā)現(xiàn)其基因組中存在11個潛在的開放讀碼框（Open reading frames,ORFs）,分別編碼病毒的結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)蛋白,在病毒致病中發(fā)揮作用,目前發(fā)現(xiàn)的只有6個ORFs（ORF1～6）。對新的ORF發(fā)現(xiàn)和鑒定將為PCV2病原學(xué)增加新成員,明確其在病毒致病中的作用,將為PCV2致病機(jī)理的揭示提供新的科學(xué)資料。我們發(fā)現(xiàn)PCV2基因組中存在一個保守的ORF,包含在ORF2基因中,在基因組的1524-1033核苷酸處（492 nt）,理論上可編碼164個氨基酸,預(yù)測... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１４?０ＲＦ７蛋白表達(dá)的Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測??Ｆｉｇ．２－１４?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｏｆ?０ＲＦ７?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??

?第三章豬圓環(huán)病毒２型０ＲＦ７蛋白對宿主細(xì)胞功能和病毒復(fù)制的影響???３?？?３結(jié)果??３．３．１?ＯＲＦ７蛋白對ＰＫ－１５細(xì)胞功能的影響??３．３．１．１?０ＲＦ７蛋白對ＰＫ－１５細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白ＧＲＰ７８基因轉(zhuǎn)錄的影卩向??將?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ－０ＲＦ７?重組質(zhì)粒和?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ?質(zhì)粒轉(zhuǎn)染?ＰＫ－１５?細(xì)??胞后，通過ＲＴ－ｑＰＣＲ對ＰＫ－１５細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋ｇ?ＧＲＰ７８?ｍＲＮＡ的表達(dá)??情況進(jìn)行了檢測。結(jié)果如圖３－１所示，與轉(zhuǎn)染ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ的ＰＫ－１５細(xì)胞組??相比較，轉(zhuǎn)染ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ－０ＲＦ７質(zhì)粒的ＰＫ－１５細(xì)胞中，ＧＲＰ７８?ｍＲＮＡ在??１２ｈ、２４ｈ上調(diào)不顯著（Ｐ＞０．０５），３６ｈ和４８ｈ被極顯箸上調(diào)（Ｐ＜０．００１），??說明０ＲＦ７蛋白可能引起ＰＫ－１５細(xì)胞內(nèi)質(zhì)阿應(yīng)激反應(yīng)。??■?ＭＯＣＫ??ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ??｜?２〇?＾?Ｂ?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ－ＯＲＦ７??ｋ?ａ??臣?１５－?，＊＊＊．?三??Ｏ?卜一Ｉ?三??＊５?自圍??１１０＇?ｎｓ?＾?＼?＼??１０?ａｔｐｉ?ｈ！?ｉ?ｉ［?ｉ??，；：＾?ｎｆ?魯?ｆ??Ｔｉｍｅ（ｈ）??圖３－１?ＯＲＦ７蛋白對ＰＫ－１５?ＧＲＰ７８基因轉(zhuǎn)錄的影響??Ｆｉｇ．３－１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＯＲＦ７?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｏｎ?ＧＲＰ７８?ｉｎ?ＰＫ－１５?ｃｅｌｌｓ??３．３．１．２?ＯＲＦ７蛋白對ＰＫ－１５細(xì)胞活性的影響??將?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ－ＯＲＦ７?重組質(zhì)粒和?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ?質(zhì)粒轉(zhuǎn)染?ＰＫ－１５?細(xì)??胞后

ｒ?Ｂｃｌ－２?ｐｒｏｔｅｉｎ?ａｆｔｅｒ??ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?０ＲＦ７；?（ｄ）?ＲＴ－ｑＰＣＲ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?Ｂａｘ?ｍＲＮＡ?ｏｆ?ａｐｏｐｔｏｔｉｃ?ｆａｃｔｏｒ?ａｆｔｅｒ??ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?０ＲＦ７；?（ｅ－ｆ）?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?ａｎｄ?ｇｒａｙ?ｓｃａｌｅ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｔｏ?ｄｅｔｅｃｔ?Ｂａｘ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｏｆ??ａｐｏｐｔｏｔｉｃ?ｆａｃｔｏｒ?ａｆｔｅｒ?ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＯＲＦ７；??圖３－６?ＯＲＦ７蛋白對ＰＫ－１５細(xì)胞Ｂｃｌ－２、Ｂａｘ的影響??Ｆｉｇ．３－６?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ＯＲＦ７?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｏｎ?Ｂｃｌ－２，?Ｂａｘ?ｉｎ?ＰＫ－１５?ｃｅｌｌｓ??同時，分析了?Ｂｃｌ－２／ＢａｘｍＲＮＡ水平的比值，結(jié)果如圖３－７所示》ｉ與轉(zhuǎn)染??ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ?質(zhì)粒組相比較，轉(zhuǎn)染?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ－０ＲＦ７?質(zhì)粒的?Ｂｃｌ＿２／Ｂａｘ??ｍＲＮＡ比值在１２?ｈ時無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Ｐ＞０．０５?），在２４?ｈ￣４８?ｈ衰達(dá)量極顯著上??升（Ｐ＜０．０１）。通過以上結(jié)果表明，０ＲＦ７蛋白是一個抗凋亡蛋白。??４－．?Ｂｌ?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ－ＯＲＦ７??＜?ｒａ?ｐＣＤＨ－ＣＭＶ－Ｆｌａｇ??ｇ?３－?Ｂ?ＭＯＣＫ??｜?Ｉ?｜?＾?＾??ｉ；ｌ｜ｌ?ＩｊｌＢｊｌＬ??＃?ｎｆ?聲?＾??Ｔｉｍｅ（ｈ）??圖３－７?０ＲＦ７蛋白對ＰＫ－１５細(xì)胞Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ?ｍＲＮＡ的影響??Ｆｉｇ．?３－７?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?０ＲＦ７?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｏｎ?Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ?ｍＲＮＡ?ｉｎ?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]NF-κB受體激活因子配體的表達(dá)及其多克隆抗體的制備[J]. 耿抒賢,劉果,張娜,劉旻翾,燕苗苗,金麗,曾巧英,劉光亮.  中國獸醫(yī)科學(xué). 2020(04)
[2]豬源轉(zhuǎn)錄因子AP-2δ通過增強(qiáng)rep基因啟動子活性促進(jìn)豬圓環(huán)病毒2型的復(fù)制[J]. 王越,宋東峰,林翠,李佳容,王勝男,顧金燕,周繼勇.  生物工程學(xué)報(bào). 2018(12)
[3]一起豬皮炎腎炎綜合征的診治[J]. 李肖冬.  廣西畜牧獸醫(yī). 2010(06)

碩士論文
[1]YWHAB蛋白與PCV2 ORF5的互作研究及其對病毒復(fù)制的影響[D]. 侯玉鳳.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2019
[2]ORF6在豬圓環(huán)病毒2型致病性中的作用研究[D]. 李冬歌.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]豬圓環(huán)病毒2型ORF5蛋白誘導(dǎo)豬肺泡巨噬細(xì)胞自噬作用及對病毒復(fù)制的影響[D]. 李然.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2018
[4]豬圓環(huán)病毒2型ORF3蛋白互作蛋白的鑒定[D]. 徐霄.浙江理工大學(xué) 2018



本文編號：3607697