對大多數(shù)單細(xì)胞原生動物的分子遺傳學(xué)研究,目前還缺乏行之有效的轉(zhuǎn)基因手段。針對這種情況,本研究以第四雙小核草履蟲為對象,將包含自身調(diào)控序列的草履蟲纖毛內(nèi)運(yùn)輸?shù)鞍祝╥ntraflagellar transport,IFT）基因IFT43或IFT46插入表達(dá)載體Pzz02-GFP中,用單細(xì)胞顯微注射術(shù)將重組質(zhì)粒注入到第四雙小核草履蟲營養(yǎng)大核內(nèi)。蛋白質(zhì)免疫印記結(jié)果顯示,與綠色熒光蛋白（green fluorescent protein,GFP）標(biāo)簽偶聯(lián)的IFT43或IFT46在草履蟲細(xì)胞中表達(dá),利用熒光顯微鏡或激光共聚焦成像系統(tǒng)觀察,IFT43-GFP與IFT46-GFP融合蛋白顯示出相似的纖毛定位,同時它們在草履蟲多纖毛內(nèi)的運(yùn)輸過程被動態(tài)記錄。本研究表明,顯微注射方法能夠在草履蟲細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)外源基因轉(zhuǎn)入和表達(dá),在對單細(xì)胞模式生物的研究中具有廣泛的應(yīng)用前景。 

【文章來源】：中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2020,36(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 單細(xì)胞顯微注射
        1.2.1 準(zhǔn)備質(zhì)粒
        1.2.2 準(zhǔn)備細(xì)胞
        1.2.3 顯微注射
    1.3 草履蟲細(xì)胞熒光觀察
    1.4 總蛋白質(zhì)提取和蛋白質(zhì)免疫印跡分析
2 結(jié)果
    2.1 表達(dá)載體的選擇
    2.2 免疫印跡證實(shí)注射后目的基因在草履蟲細(xì)胞中表達(dá)
    2.3 IFT46-GFP和IFT43-GFP融合蛋白在草履蟲細(xì)胞中的定位和動態(tài)運(yùn)輸
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]進(jìn)展中的纖毛蟲學(xué)研究:新格局、新窗口與新拓展[J]. 胡曉鐘,趙研,黃潔,高鳳,高珊,邵晨,宋微波.  中國海洋大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2019(10)
[2]八肋游仆蟲含綠色熒光蛋白基因的大核人工染色體的構(gòu)建[J]. 李娜,柴寶峰,王景濤,梁愛華.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報. 2009(05)



本文編號：3595582