【背景】許多研究表明,支原體的NADH氧化酶（NADH oxidase,NOX）不僅在胞漿中發(fā)揮生物酶學(xué)功能,也存在于細(xì)胞膜上發(fā)揮黏附宿主細(xì)胞功能�！灸康摹繉褐гw（Mycoplasma synoviae,MS）的NOX進(jìn)行酶學(xué)活性及亞細(xì)胞定位研究,分析其在MS致病過程中的潛在作用�！痉椒ā繉S的NOX蛋白進(jìn)行原核表達(dá)、純化,然后對重組MSNOX （rMSNOX）的酶學(xué)活性及影響酶活的條件進(jìn)行研究,測定其酶比活力、米氏常數(shù)及最大反應(yīng)速率,接著用MS陽性血清及制備的rMSNOX兔多克隆抗體,分別與rMSNOX蛋白及MS全菌、膜蛋白和胞漿蛋白進(jìn)行Western blotting反應(yīng),鑒定rMSNOX的免疫原性及其在MS中的分布情況�！窘Y(jié)果】在大腸桿菌BL21（DE3）中成功表達(dá)rMSNOX蛋白,相對分子質(zhì)量約為53 kD,并獲得純化的rMSNOX蛋白;酶活測定顯示rMSNOX蛋白的酶比活力為14.17IU/mg,最適酶促溫度為37℃,最適pH為7.5,雙倒數(shù)法求得rMSNOX的最大反應(yīng)速率V_max為21.8μmol/（L·min）,米氏常數(shù)K_m

【文章來源】：微生物學(xué)通報(bào). 2020,47(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：12 頁

【部分圖文】：

不同NOX蛋白的序列比對

重組菌的雙酶切鑒定及PCR鑒定

將重組表達(dá)菌株E.coli BL21(p ET-28a-MSnox)經(jīng)IPTG誘導(dǎo)前的全菌蛋白、誘導(dǎo)后的全菌蛋白、誘導(dǎo)后的上清蛋白以及經(jīng)His-tag標(biāo)記磁珠純化的重組蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析，結(jié)果顯示重組表達(dá)菌株經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，在53 kD左右有明顯的蛋白表達(dá)條帶，經(jīng)純化后的r MSNOX蛋白條帶較純(圖4)。圖3 重組菌的雙酶切鑒定及PCR鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[3]滑液支原體乳酸脫氫酶生物學(xué)功能的研究[D]. 任峰.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
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本文編號：3594986