發(fā)布時間：2022-01-16 23:12

　　骨骼肌生成是一個高度有序的過程,包括成肌細胞的增殖、細胞融合形成肌管以及這些肌管進一步分化為肌纖維。這一過程需要依賴轉(zhuǎn)錄因子和信號轉(zhuǎn)導途徑之間的連續(xù)級聯(lián)調(diào)節(jié)作用。實驗室之前的一項研究表明,TCEA3能促進牛骨骼肌衛(wèi)星細胞的分化,但是其作用的分子機制尚不清楚。本實驗以小鼠為模型,研究TCEA3的作用及分子機制。TCEA3是轉(zhuǎn)錄延伸因子家族的成員。其不僅可以促進轉(zhuǎn)錄,在細胞質(zhì)中還行使其他作用。我們通過免疫共沉淀實驗發(fā)現(xiàn)ANXA1與TCEA3相互作用,我們推測TCEA3和ANXA1在小鼠成肌細胞分化的過程中扮演重要角色。在本研究中,我們檢測了TCEA3和ANXA1在C2C12成肌細胞中的表達,定位和作用;檢測了TCEA3在過表達和抑制后蛋白質(zhì)表達量的變化和肌纖維數(shù)量的改變;并發(fā)現(xiàn)TCEA3與ANXA1相互作用通過調(diào)節(jié)TGF-β途徑影響細胞分化;以此說明TCEA3在小鼠成肌細胞分化中的作用。主要獲得的研究結(jié)果如下:（1）隨著C2C12成肌細胞肌管的增加TCEA3的表達逐漸增加。在增殖期（0 D）和不同分化期（分化1-9 D）間,隨著C2C12成肌細胞肌管逐漸增加,TCEA3的熒光強度逐漸增加。... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

pEGFP-N2載體質(zhì)粒圖譜

東北農(nóng)業(yè)大學理學碩士學位論文合成。表 2-2 TCEA3 基因的激活靶序列ab. 2-2 Four sgRNAs targeting different sites of TCEA3 promoter regio. 序列3-1 CACCGCTTGGGCATAGCTCCCTCT3-2 CACCGCCACCCCTCCCCCCAGCGA3-3 CACCGTGTCCCGGAAGAAGACGGA3-43-5CACCGAAGAAGACGGAAGGGGCCCCACCGGCCCCTGCTACCTCACCG pSPgRNA 載體：pSPgRNA 載體見圖 2-2，酶切體系如表 2-3。

綠色熒光表示 TCEA3 蛋白的分布，藍色表示核的存在。標尺：100μm。圖 3-2 免疫熒光檢測 TCEA3 在 C2C12 細胞中的定位。.3-2 Immunofluorescence detection localization of TCEA3 at C2C12 cell differentiation 核質(zhì)蛋白提取檢測 TCEA3 在 C2C12 成肌分化不同時期的定位別收集分化 0 天（0 D）、3 天（3 D）、5 天（5 D）的 C2C12 成肌細胞，根據(jù)核質(zhì)蛋劑盒上的步驟進行核質(zhì)蛋白分離。采用 Western Blot 檢測這三個時期 TCEA3 蛋白表。實驗結(jié)果表明，TCEA3 主要在細胞質(zhì)中表達，隨著分化的進展，TCEA3 的表達趨勢。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]The effects of microRNA-34a regulating Notch-1/NF-κB signaling pathway on lipopolysaccharide-induced human umbilical vein endothelial cells[J]. Yun Ge,Man Huang,Yue-feng Ma.  World Journal of Emergency Medicine. 2017(04)
[2]TGF-β and BMP signaling in osteoblast,skeletal development,and bone formation,homeostasis and disease[J]. Mengrui Wu,Guiqian Chen,Yi-Ping Li.  Bone Research. 2016(01)



本文編號：3593597