遺傳密碼子拓展系統(tǒng)目前主要應(yīng)用于生命系統(tǒng)蛋白質(zhì)的標(biāo)記和修飾,能夠與反向遺傳學(xué)技術(shù)相結(jié)合,通過將終止密碼子UAG變?yōu)橛辛x密碼子,將非天然氨基酸（unnatural amino acids,UAAs）靶向引入到蛋白質(zhì)的特定位點,實現(xiàn)非天然氨基酸對病毒表型的靶向控制。目前,遺傳密碼子拓展系統(tǒng)已成功應(yīng)用于丁型肝炎病毒（HDV）、腺病毒、人類免疫缺陷病毒1型（HIV-1）和流感病毒等,實現(xiàn)了非天然氨基酸對病毒顆粒的表面修飾以及對病毒復(fù)制和感染的調(diào)控。通過將遺傳密碼子拓展系統(tǒng)與反向遺傳學(xué)技術(shù)相結(jié)合并擴展應(yīng)用于重要的人類病原體,可以實現(xiàn)非天然氨基酸對病毒復(fù)制和感染的系統(tǒng)調(diào)控,將為其遺傳改造、致病機制研究和疫苗設(shè)計提供重要的思路。寨卡病毒（Zika virus,ZIKV）屬于黃病毒科黃病毒屬,為單股正鏈RNA病毒,主要依靠蚊蟲傳播,自暴發(fā)流行以來引起了全世界的廣泛關(guān)注。寨卡病毒與黃熱病毒（yellow fever virus,YFV）、西尼羅病毒（West Nile virus,WNV）、登革病毒（dengue virus,DENV）、乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis viru... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

特異性的引入非天然氨基酸

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文13非洲和亞洲狹窄的赤道地區(qū)。1966年，第一個在非洲以外分離的寨卡病毒株是從馬來西亞的埃及伊蚊中分離獲得[23]。2007年以前，寨卡病毒僅在亞洲和非洲有散發(fā)的病例報道，且沒有引起可察覺的暴發(fā)和嚴(yán)重的人類疾病[24]。此后，在西太平洋地區(qū)的密克羅尼西亞雅浦島，首次暴發(fā)了大規(guī)模的寨卡疫情，寨卡病毒感染了全島四分之三的居民[25]。接著寨卡病毒又在東南亞的一些國家出現(xiàn)了散發(fā)病例。2013-2014年，寨卡病毒在法屬波利尼西亞和南太平洋等其他地區(qū)發(fā)生了大流行，并于2014年擴散至美洲，造成超過70萬例本地感染[26,27]。2015年寨卡病毒在巴西大暴發(fā)，并迅速擴散至其他國家，最后波及全球80多個國家和地區(qū)[28]（圖2）。更重要的是，隨著寨卡病毒的大范圍流行，發(fā)現(xiàn)其感染可導(dǎo)致格林巴利綜合征（Guillain-Barrésyndrome，GBS）、新生兒小頭癥等嚴(yán)重疾病，引起了全世界的廣泛關(guān)注[29-31]。2016年2月1日，WHO宣布可能與寨卡病毒感染相關(guān)的小頭畸形和其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病聚集性病例構(gòu)成國際關(guān)注突發(fā)公共衛(wèi)生事件[32]。目前，針對寨卡病毒感染尚無獲批的臨床疫苗，且缺乏有效的治療手段[33]。因此,研制寨卡疫苗的需求十分迫切。圖22007-2016年寨卡病毒的暴發(fā)[28]Figure2Zikavirusoutbreaksfrom2007-2016[28]

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文172.2.3.1引物設(shè)計以寨卡病毒分離株FSS13025的全長感染性克隆基因組序列為模板，根據(jù)NEB的Q5點突變試劑盒（Q5Site-DirectedMutagenesisKit）要求以及突變位點的位置，在NEB的網(wǎng)站上使用NEBaseChangerTM在線設(shè)計軟件，設(shè)計相應(yīng)的突變引物（Table1）。突變質(zhì)粒構(gòu)建示意圖如圖1所示。引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，序列如Table1所示。圖1-1攜帶琥珀終止密碼子的寨卡病毒全長感染性克隆的構(gòu)建Figure1-1ConstructionoftheZIKVfμLl-lengthcDNAclonewiththemutationofamberterminalcodon表1-2寨卡病毒琥珀終止密碼子的突變引物Table1-2PrimersusedtomutantamberterminalcodonofZIKV引物名稱引物序列（5’-3’）退火溫度FSS-NS5-22FGATGTCGGCCtagGAGTTCTACTCCTACAAAAAG68℃FSS-NS5-22RTGGTTCAGGCGGGCCTTC71℃FSS-NS5-108FAAAAGGAGGCtagGGTCATGAAGAAC58℃FSS-NS5-108RGTGTATCCTTTCACTTCTTG58℃FSS-NS5-153FGTCATCATCTtagCCTGAAGTGGAAGAAG56℃FSS-NS5-153RTCACCTATATCACACAGC58℃FSS-NS5-246FGCGCATGGACtagCCCAGGAGGC67℃FSS-NS5-246RCCCAAAAGGAGCTGGCTC66℃FSS-NS5-268FGGCTGTGGTAtagTGCGCTGAAGCTCCCAACATGAAGATC70℃


本文編號：3582960