以耐有機(jī)溶劑菌庫中的巨大芽孢桿菌（Bacillus megatherium）YZ08為模板,設(shè)計(jì)相關(guān)引物克隆出糖基轉(zhuǎn)移酶基因bmgt,構(gòu)建工程菌E.coli BL21（DE3）/pET28a-bmgt,誘導(dǎo)表達(dá)獲得了糖基轉(zhuǎn)移酶GT_BM。His-tag標(biāo)簽法純化得到電泳純的糖基轉(zhuǎn)移酶GT_BM,考察pH、溫度、金屬離子對(duì)酶活的影響及GT_BM對(duì)二甲基亞砜（DMSO）的耐受性。建立糖基轉(zhuǎn)移酶GT_BM蔗糖合成酶SuSy雙酶耦聯(lián)催化體系,優(yōu)化pH、溫度、DMSO濃度、蔗糖濃度、酶液添加量等參數(shù)對(duì)雙酶耦聯(lián)糖基化芹菜素的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn):GT_BM有著較好的DMSO耐受性,在pH 7.5、溫度35℃、10%（體積分?jǐn)?shù)）DMSO、20 mmol/L蔗糖、0.1 mmol/L尿苷二磷酸（UDP）、60 mU/mL GT_BM和20 mU/mL蔗糖合成酶SuSy條件下,芹菜素糖基化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率在4 h達(dá)到95%,且產(chǎn)物單一。GT_BM有著較好的DMSO耐受性、區(qū)域... 

【文章來源】：生物加工過程. 2020,18(06)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

糖基轉(zhuǎn)移酶和蔗糖合成酶的UDPG

由圖4可知:當(dāng)pH在7.5時(shí),其酶活達(dá)到最大,最適pH為7.5,在偏堿性緩沖中具有較大的酶活;在pH為7.0～8.5時(shí),該酶表現(xiàn)出最大酶活力的80%以上。在相同pH的不同緩沖液中,其酶活也有略微差別。pH為7.5～8.0時(shí),相同pH下,在Na2HPO4-KH2PO4中的GTBM活性略高于在Tris-HCl中的酶活,這與文獻(xiàn)[21]報(bào)道的結(jié)果基本一致。圖4 pH、溫度、金屬離子和DMSO對(duì)GTBM酶活力的影響

pH、溫度、金屬離子和DMSO對(duì)GTBM酶活力的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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