基于質(zhì)譜的Bottom-up鑒定方法是目前應(yīng)用最為廣泛的蛋白質(zhì)組學(xué)研究策略,它的主要流程是將復(fù)雜的蛋白質(zhì)樣品用酶消化成肽段,然后運(yùn)用液相色譜分離,后續(xù)接串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè),對(duì)結(jié)果進(jìn)行檢索,根據(jù)獲得的肽段譜圖,與數(shù)據(jù)庫進(jìn)行匹配,檢索蛋白質(zhì)。這種研究方法面臨著樣本中蛋白質(zhì)種類多、豐度分布動(dòng)態(tài)范圍極寬的挑戰(zhàn)。目前為止,仍然沒有一種分離方法能夠在一個(gè)維度上分辨所有肽段組分。因此,在質(zhì)譜分析前端,運(yùn)用二維液相系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)分離,降低質(zhì)譜進(jìn)樣前樣本復(fù)雜程度,成為當(dāng)前降低蛋白質(zhì)組復(fù)雜性的重要策略。高pH反相分餾作為第一維離線色譜分離,與低pH反相液相聯(lián)合成二維液相色譜分離,再與質(zhì)譜相聯(lián)用的方法,在復(fù)雜生物樣本蛋白質(zhì)組深度覆蓋和差異分析研究中獲得廣泛應(yīng)用。常規(guī)高效液相色譜采用線性連續(xù)梯度洗脫模式,具有較高分離效率,而且能靈活改變級(jí)聯(lián)收集方案,但常規(guī)液相仍存在各種限制,如對(duì)初始樣本的大量需求和復(fù)雜的合并過程,以及由此帶來的肽段的吸附損失。針對(duì)以上問題,本文嘗試建立基于超高效液（UPLC）和八端口轉(zhuǎn)子閥的微升級(jí)預(yù)分離系統(tǒng),在微量樣本的情況下,實(shí)現(xiàn)對(duì)其蛋白質(zhì)組的深度覆蓋。本論文前言部分介紹了常見的二維液相分離方法,蛋... 

【文章來源】：廣東藥科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【圖文】：

八端口轉(zhuǎn)子閥分餾原理及分餾實(shí)驗(yàn)流程

pH10條件，BSA酶切肽段紫外譜圖

胞蛋白提取液酶切肽段預(yù)分離前，使用 BSA 酶切肽段作為標(biāo)品上樣，得到的紫外譜圖，如圖 2-2。在低 pH 條件，細(xì)胞蛋白提取液酶切肽段預(yù)分離前，也使用 BSA酶切肽段作為標(biāo)品上樣，得到紫外譜圖，如圖 2-3。圖 2-2 pH 10 條件，BSA 酶切肽段紫外譜圖Fig.2-2 UV (214 nm) chromatogram of BSA for pH 10


本文編號(hào)：3557320